Biomikroskopi med avseende på volymen av vävnadsblock
Biologisk mikroskopi Hittills är kallfixering, fryst ultratunt snitt och frystorkning rutinmetoder för vävnads- och cellröntgenmikrosnitt. Detaljerna för denna metod förklaras enligt följande:
För biologiska mikroskop med kondensor kan kondensorn flyttas upp och ner för att göra ljusstyrkan måttlig, och bländaren på det variabla ljuset kan också ändras för att uppnå en måttlig 9b ljusstyrka. Om ljuset är soligt kan kondensorn höjas på lämpligt sätt och den variabla ljuskällans öppning kan förstoras på lämpligt sätt. Om ljuset är för starkt kan kondensorlinsen sänkas på lämpligt sätt, och bländaren för det korsande ljuset kan reduceras på lämpligt sätt. Om du fortfarande känner dig bländande i det här fallet kan du välja ett lämpligt filter och placera det på fästet under kondensorn. Denna ek kommer att kunna få den ljusstyrka som tillfredsställer dig. Att justera kondensorns övre och nedre positioner, justera bländarstorleken på den variabla optiska avläsningen och välja ett lämpligt filter kräver naturligtvis en viss tid av övning för att få erfarenhet.
En mycket viktig fråga inom biologisk mikroskopi är att i processen för provtagning och separering av celler, efter frystorkning och hartsinbäddning (FD), efter frysning av ultratunna aggregat och efter frystorkning, innehållet av 65 element i varje del måste hanteras varsamt. Cellerna som ska analyseras kan inte skadas. För röntgenmikroanalys innebär inte bara många steg, utan kostar också mycket. Om de analyserade cellerna är skadade celler eller döda celler efter lång tid och flerstegsbearbetning är det mycket beklagligt att dra felaktiga slutsatser. Till exempel har kardiomyocyter separerade genom kollagenasbehandling två former, den ena är lång stavformad och den andra är rund. De senare är döende celler som skadas under cellisolering.
Biomikroskopi Mängden och fördelningen av elektrolyter i dessa två typer av celler är ganska olika. Na är mycket högt och K är mycket lågt i cirkulära kardiomyocyter, och koncentrationen av ca i nematoder är mycket hög. Efter kontroll med andra analysmetoder är det bevisat att runda cellers höga Na och låga K och höga Ca i mitokondrier beror på skadan på cellmembranet under cellseparationsprocessen. Den iskalla fixeringsmetoden för celler och vävnader är vanligtvis att först anta släckning och fixering och sedan lagra dem i flytande kväve. Släckande fixering är mycket viktig för effekten av konservering. Levande celler eller färska vävnader är rika på vatten. Vid släckning fryses ofta de delar av cellerna eller vävnaderna som är i direkt kontakt med det krossade köldmediet (särskilt vid släckning med flytande kväve) och fixeras först, vilket bildar ett "skal", vilket hindrar cellernas centrala delar var krossad och kallfixerad. Därför, när man gör X-line mikroområdesanalys, finner man ofta att det finns iskristaller i mitten av större celler. För att förhindra att detta inträffar används ett ämne med en smältpunkt som är högre än flytande kväve men lägre än 806c som ett trasigt köldmedium. Det finns många sådana ämnen, men det billigaste är koncentrerad propan (kokpunkt - 42.120c, smältpunkt - 187.10c, molekylvikt 44.1), och kylningshastigheten är den snabbaste. Men dess nackdel är att den är brandfarlig.
Biologiskt mikroskop kan sätta muskelfibern på ett speciellt ställ, så att när muskelfiberkontraktionen når en viss fas och måste fixas, starta omedelbart munstycket för att spraya flytande propan till muskelfibern för att släcka och fixera den. Därefter togs muskelfibrerna tillsammans med ramen ut och sattes i flytande kväve. Om du fixerar blodceller eller isolerade celler, koncentrera först cellerna genom centrifugering vid låg hastighet, överför cellerna till en silverflaska med god värmeledningsförmåga, placera flaskan i flytande propan och frys in för fixering. Vid fixering av råttbukspottkörteln i Hall-laboratoriet förkyldes de två stålblocken med flytande helium (eller flytande kväve), och de två kopparblocken klämdes fast med pincett och placerades på fram- och baksidan av bukspottkörteln för att släcka och fixera bukspottkörteln. Vävnader eller celler kan lagras i flytande kväve för långtidslagring efter släckning och fixering.
Biologisk mikroskopi Förutom den mest respekterade metoden för frysta ultratunna snitt finns här en annan deponeringsteknik som används av forskare. Ett ämne tillsätts för att bilda ett sediment med den komponent som ska analyseras för att immobilisera den före analys, och sedimentet analyseras sedan. Till exempel använder människor ofta oxalat och pyroantimonat för att deponera ca i muskelceller. Den förra är inte tillräckligt känslig för den låga koncentrationen av Ca i cytoplasman; pyroantimonat är känsligare och kan bilda elektrontäta avlagringar med fritt Ca i hjärnan, men pyroantimonat är inte kompatibelt med natrium, mangan, barium, järn Avlagringar bildas också och är mindre specifika. Provberedningsprocessen liknar beredningen av vanliga transmissionselektronmikroskopexemplar med ultratunna sektioner, skillnaden är att 3 procent kaliumpyroantimonat (fosfatbuffert saltlösning, pH 7,6) fixerades i 6 timmar före fixering, och på de färgade muskelsektionerna, Svarta avlagringar sågs i mittlinjen av band A och 2 av varje sarkomer, och ofärgade sektioner användes för röntgenmikroanalys. Diaminobensidintetrahydroklorid (DAB) användes för att fälla ut heminnehållande ämnen och så vidare. Kombinationen av histokemisk utfällningsreaktion och mikrodifferentieringsbrygga med röntgen kan övervägas i laboratorier som inte har frusna ultratunna sektionsförhållanden. Semi-kvantitativ kan göras i enlighet med topphöjden för de grundämnen som ska analyseras
