Bestämning av antalet mikroorganismer-Mikroskopisk direkträkningsmetod!
Bakteriepopulationstillväxt manifesteras av en ökning av cellantal eller en ökning av cellulärt material. Metoder för att bestämma antalet celler inkluderar direkt mikroskopisk räkning, plattantal, turbiditetsuppskattning med spektrofotometer, mest troligt antal MPN och membranfiltrering. (membranfiltrering) etc. Metoder för att mäta cellulära ämnen inkluderar bestämning av celltorrvikt, bestämning av vissa cellkomponenter såsom kvävehalt, RNA- och DNA-halt samt bestämning av metabolitprodukter. Kort sagt, det finns många metoder för att mäta mikrobiell tillväxt, var och en med sina egna fördelar och nackdelar. Metoden bör väljas enligt de specifika kraven för arbetet. Detta experiment introducerar huvudsakligen mikroskopets direkträkningsmetod som vanligtvis används i produktion och vetenskapligt forskningsarbete.
1. Syfteskrav
1. Förtydliga principen för räkning med en blodcellsräkningstavla.
2. Bemästra metoden att räkna mikroorganismer med hjälp av en blodcellsräkningstavla.
2. Grundläggande principer
Mikroskop direkträkningsmetod är en enkel, snabb och intuitiv metod som placerar en liten mängd suspension av provet som ska testas på ett speciellt objektglas med en bestämd yta och volym (även kallad bakteriometer) och räknar den direkt under ett mikroskop. Metoder. För närvarande är vanliga bakteriometrar hemma och utomlands: hemocytometer, Peteroff-Hauser-bakteriometer och Hawksley-bakteriometer, etc. De kan alla användas för att räkna jäst, bakterier, mögelsporer och andra suspensioner, och de grundläggande principerna är desamma. De två sistnämnda bakterieräknarna har en total volym på 0.02 mm3 efter att ha täckts med ett täckglas, och avståndet mellan täckglaset och objektglaset är endast 0,02 mm. Därför kan en oljesänkningsobjektiv användas för att observera och detektera mindre celler som bakterier. räkna. Förutom att använda dessa bakteriometrar finns det också en uppskattningsmetod som direkt observerar förhållandet mellan utstrykningsytan och synfältsytan under ett mikroskop. Denna metod används vanligtvis för bakteriologisk undersökning av mjölk. Fördelarna med direkträkningsmetoden med mikroskop är att den är intuitiv, snabb och enkel att använda. Nackdelen med denna metod är dock att det uppmätta resultatet vanligtvis är summan av döda bakterier och levande bakterier. Det finns för närvarande några metoder för att övervinna denna brist, såsom att kombinera livsdugliga bakterier som färgar mikrokammarkultur (kort tid) och lägga till celldelningshämmare för att uppnå syftet att endast räkna livsdugliga bakterier.
Detta experiment använder en hemocytometer som ett exempel för att utföra direkt räkning under ett mikroskop. För användning av de andra två bakteriometrarna, se instruktionerna från respektive tillverkare. Direkt räkning i mikroskop med hjälp av en hemocytometer är en vanlig mikrobiell uppräkningsmetod. Räknebrädan är en speciell rutschbana med fyra spår som bildar tre plattformar; den bredare plattformen i mitten är uppdelad i två halvor av ett kort horisontellt spår, och det finns ett rutnät på varje sida av plattformen. Varje fyrkantsrutnät är uppdelat i nio stora rutor, och den stora fyrkanten i mitten är räknerummet. Strukturen på blodcellsräkningstavlan visas i figur {{0}}. Det finns i allmänhet två specifikationer för räknekammarens skala. En är en stor kvadrat uppdelad i 25 medelstora rutor, och varje medelstor ruta är uppdelad i 16 små rutor (Figur 15-2); den andra är ett stort torg. Det fyrkantiga rutnätet är uppdelat i 16 medelstora rutor, och varje medelstor ruta är uppdelad i 25 små rutor. Men oavsett vilken typ av räknebräde det är, finns det 400 små rutor i varje stor ruta. Sidans längd på varje stor ruta är lmm, då är arean för varje stor ruta lmm2. Efter att täckglaset är täckt är höjden mellan täckglaset och objektglaset 0,1 mm, så volymen på räknekammaren är 0,1 mm3 (en tiotusendels milliliter). Figur 15-1 Blodcellsräknarens struktur (1) Figur 15-2 Blodcellsräknarens struktur (2) A. Framifrån; B. Längdsnitt; förstorat kvadratiskt rutnät, den stora kvadraten i mitten är räknekammaren 1. Blodkroppar Räknebräda; 2. Täckglas; 3. När du räknar i räknekammaren, räkna vanligtvis det totala antalet bakterier i fem rutor, hitta sedan medelvärdet för varje kvadrat och multiplicera sedan med 25 eller 16 för att få Det totala antalet bakterier i en stor kvadrat omvandlas sedan till det totala antalet bakterier i 1 ml bakterielösning. Antag att det totala antalet bakterier i de fem mittersta kvadraterna är A, och spädningsfaktorn för bakterielösningen är B. Om det är en räkneplatta med 25 mittersta kvadrater, då är det totala antalet bakterier i 1mL av bakterielösningen {{ 23}} A/5×25×104× B=50000A·B (bitar) På samma sätt, om det är en räkneplatta med 16 rutor, det totala antalet bakterier i 1mL bakterielösning {{ 30}}A/5×16×104×B=32000A·B (bitar),,
