Skillnader och fördelar och nackdelar mellan transmissionsfluorescensmikroskopi och reflektionsfluorescensmikroskopi
1. Transmissionsfluorescensmikroskop: Excitationsljuskällan överförs genom provmaterialet genom en kondensor för att excitera fluorescens. Vanligt använda mörkfältskoncentratorer, eller vanliga koncentratorer, kan användas för att justera reflektorn för att omvandla excitationsljus och sidoljus till provet. Detta är ett relativt gammaldags fluorescensmikroskop. Dess fördel är stark fluorescens vid låg förstoring, medan dess nackdel är att dess fluorescens försvagas med ökande förstoring. Därför är det bättre att observera större provmaterial.
2. Fallande stråle fluorescensmikroskop: Detta är en ny typ av fluorescensmikroskop som har utvecklats i modern tid. Till skillnad från den föregående faller excitationsljuset ner från objektivlinsen på ytan av provet, med samma objektivlins som belysningskondensorn och objektivlinsen för att samla fluorescens. En strålseparator med två färger måste läggas till den optiska banan, som bildar en 45 graders vinkel med fotouranet. Excitationsljuset reflekteras in i objektivlinsen och samlas på provet. Fluorescensen som genereras av provet och excitationsljuset som reflekteras från ytan av objektivlinsen och täckglaset kommer samtidigt in i objektivlinsen och återgår till strålseparatorn med två färger, vilket separerar excitationsljuset och fluorescensen. Det kvarvarande excitationsljuset absorberas sedan av blockeringsfiltret. Om olika kombinationer av excitationsfilter, tvåfärgade strålseparatorer och blockeringsfilter används kan de tillgodose behoven hos olika fluorescerande reaktionsprodukter. Fördelarna med detta fluorescerande mikroskop är enhetlig synfältsbelysning, tydlig avbildning och starkare fluorescens med högre förstoring.
Fördelar och nackdelar med transmissionsfluorescensmikroskopi
Ljuskälla: Högtryckskvicksilverlampa eller halogenlampa.
Spotlight-spegel: Använder en mörkfältsspotlight för att separera excitation och fluorescens.
Objektivlins: Alla typer av objektivlinser kan användas.
Prov: Tunna prover är mer lämpade för överföringsobservation.
Fördelar: ① På grund av användningen av en mörkfältskondensor kan inte excitationsljuset komma in i objektivlinsen, vilket gör det lätt att bilda en mörk bakgrund och uppnå bra kontrast, och vilken objektivlins som helst kan användas för observation. ② När ett objektiv med låg förstoring används är det ljusare än ett reflekterande fluorescensmikroskop.
Nackdel: Strålkastarens centrum och höjd måste justeras korrekt, annars kan en ljus fluorescerande bild inte erhållas. På grund av brännviddsbegränsningen för mörkfältsstrålkastaren kan tjocka glasskivor inte användas. Belysningsområdet för synfältet bör inte vara för stort, annars kan det göra att fluorescensfärgen på det fluorescerande provet bleknar. Tjocka eller ogenomskinliga prover är inte lämpliga.
Fördelar och nackdelar med reflekterande fluorescensmikroskopi
Ljuskälla: Högtryckskvicksilverlampa eller halogenlampa.
Fokuseringslins: Eftersom objektivlinsen fungerar som en fokuseringslins, finns det inget behov av en fokuseringslins.
Objektivlins: Den använda objektivlinsen måste kunna sända tillräckligt med ultraviolett ljus och inte producera fluorescens själv, utan begränsning av numerisk bländare.
Prov: Både tjocka och ogenomskinliga prover kan observeras.
Fördelar: ① Eftersom objektivlinsen också fungerar som en spotlight, kräver den inte mycket justering. ② Genom att använda Kolar-belysningsmetoden kan effekterna av bländare och synfältsöppningar utnyttjas. Den numeriska bländaren för objektivlinsen är inte begränsad, och högupplösta bilder kan också erhållas med hög förstoring Tjocka eller ogenomskinliga exemplar kan också observeras, och tjocka täckglas kan också användas. Andra observationsmetoder kan också kombineras med reflekterad fluorescens, speciellt med fasskillnadsmetod och transmissionsdifferentialinterferensmetod. Det kan undvika onödiga fluorescensfärgblekningsfenomen.
Nackdel: När man använder ett markförstoringsobjektiv är bilden relativt mörk, så ett objektiv med hög numerisk bländare måste användas. Filtersystemet måste effektivt separera excitationsluminescens och fluorescens.,
