Skillnader mellan fluorescensmikroskopi och konfokal mikroskopi
fluorescensmikroskop
1. Fluorescensmikroskop använder ultraviolett ljus som en ljuskälla för att bestråla objektet som inspekteras, vilket får det att avge fluorescens och sedan observera formen och positionen för objektet under mikroskopet. Fluorescensmikroskopi används för att studera absorption, transport, distribution och lokalisering av ämnen inom celler. Vissa ämnen i celler, såsom klorofyll, kan fluorescera när de utsätts för ultraviolett strålning; Det finns också några ämnen som inte kan avge fluorescens själva, men som också kan avge fluorescens om de färgas med fluorescerande färgämnen eller fluorescerande antikroppar och bestrålas med ultraviolett ljus. Fluorescensmikroskopi är ett av verktygen för kvalitativ och kvantitativ forskning om sådana ämnen.
2. Princip för fluorescensmikroskop:
(A) Ljuskälla: Ljuskällan avger ljus för olika våglängder (från ultraviolett till infraröd).
(B) Excitation Filter Ljuskälla: Sändande ljus av en specifik våglängd som kan orsaka fluorescens i provet, samtidigt som det blockeras ljus som är värdelöst för spännande fluorescens.
(C) Fluorescerande prover: Vanligtvis färgade med fluorescerande pigment.
(D) Blockeringsfilter: Det selektivt överför fluorescens genom att blockera excitationsljus som inte absorberas av provet, och vissa våglängder i fluorescensen överförs också selektivt. Ett mikroskop som använder ultraviolett ljus som en ljuskälla för att göra det upplysta objektet avger fluorescens. Elektronmikroskopet monterades först av Knorr och Haruska i Berlin, Tyskland 1931. Detta mikroskop använder höghastighetselektronstrålar istället för lätta balkar. På grund av den mycket kortare våglängden för elektronflöde jämfört med ljusvågor kan förstoringen av ett elektronmikroskop nå 8 0 0000 gånger, med en minsta upplösningsgräns på 0,2 nanometer. Skanningselektronmikroskopet, som först användes 1963, gör det möjligt för människor att se de små strukturerna på ytan av föremål.
3. Applikationens omfattning: Används för att förstora bilder av små objekt. Används vanligtvis för observationer av biologi, medicin, mikroskopiska partiklar etc.
konfokalmikroskop
1. Konfokalt mikroskop lägger till en halv reflekterande halva linsen till den reflekterade ljusvägen, som avleder det reflekterade ljuset som har passerat genom linsen i andra riktningar. Vid sin kontaktpunkt finns det en baffel med ett nålhål beläget vid kontaktpunkten, och bakom baffeln finns ett fotomultiplikatorrör. Det kan föreställas att det reflekterade ljuset före och efter detekteringsljusfokus inte kan fokuseras på det lilla hålet genom detta konfokala system och kommer att blockeras av baffeln. Så fotometern mäter den reflekterade ljusintensiteten vid kontaktpunkten.
2. Princip: Traditionella optiska mikroskop använder fältljuskällor, och bilden av varje punkt på provet påverkas av diffraktion eller spridda ljus från angränsande punkter; Laserskanningskonfokalt mikroskop använder en laserstråle för att belysa ett nålhål och bilda en punktljuskälla för att skanna varje punkt på provets fokalplan. Den upplysta punkten på provet avbildas vid detekteringsnålhålet och tas emot punkt för punkt eller linje av ett fotomultiplierrör (PMT) eller en kall kopplingsanordning (CCCD) efter detektering av nålhålet och bildar snabbt en fluorescensbild på datorskärmskärmen. Illumineringsnålhålet och detekteringsnålhålet är konjugat relativt fokalplanet för objektivlinsen. Punkterna på fokalplanet är samtidigt inriktade på belysningsstiftet och utsläppsnålhålet, och punkter utanför fokalplanet kommer inte att avbildas vid detekteringsnålhålet. Den resulterande konfokala bilden är det optiska tvärsnittet av provet och övervinner nackdelen med suddiga bilder i allmänna mikroskop.
