Fluorescensmikroskop princip tillämpning och användning
(1) Principen och strukturella egenskaper hos fluorescensmikroskopet: fluorescensmikroskopet använder en punktljuskälla med hög ljuseffektivitet för att avge ljus med en viss våglängd (som ultraviolett ljus 3650 tum eller lila blått ljus 4200 tum) genom filtersystemet som excitationsljuset för att excitera provet. Efter att det fluorescerande ämnet inuti avger fluorescens i olika färger, observeras det genom förstoringen av objektivlinsen och okularet. På så sätt, under en stark kontrastbakgrund, även om fluorescensen är mycket svag, är den lätt att identifiera och har hög känslighet. Det används främst för forskning om cellstruktur och funktion och kemisk sammansättning. Grundstrukturen för ett fluorescensmikroskop är sammansatt av ett vanligt optiskt mikroskop plus några tillbehör (som en fluorescerande ljuskälla, ett excitationsfilter, en tvåfärgad stråldelare och ett blockerande filter, etc.). Fluorescerande ljuskälla - använd i allmänhet ultrahögtryckskvicksilverlampa (50-200W), som kan avge ljus med olika våglängder, men varje fluorescerande ämne har en excitationsvåglängd som ger den starkaste fluorescensen, så ett excitationsfilter ( Generellt, det finns ultravioletta, lila, blåa och gröna excitationsfilter), som endast tillåter excitationsljus av en viss våglängd att passera genom och bestråla provet, samtidigt som det absorberar annat ljus. Efter att varje ämne har bestrålats med excitationsljus avger det synlig fluorescens med en längre våglängd än bestrålningsvåglängden på mycket kort tid. Fluorescens är specifik och i allmänhet svagare än excitationsljus. För att observera specifik fluorescens krävs ett blockerande (eller undertryckande) filter bakom objektivlinsen. Den har två funktioner: den ena är att absorbera och blockera excitationsljuset från att komma in i okularet, för att inte störa fluorescensen och skada ögonen; den andra är att välja och låta den specifika fluorescensen passera igenom och visa en specifik fluorescerande färg. De två filtren måste användas tillsammans.
Det finns två typer av fluorescensmikroskop när det gäller deras optiska vägar:
1. Transmissionsfluorescensmikroskop: Excitationsljuskällan förs genom provmaterialet genom en kondensorlins för att excitera fluorescens. En mörkfältsamlare används vanligtvis, och en vanlig uppsamlare kan också användas för att justera spegeln så att excitationsljuset omdirigeras och förbigås till provet. Detta är ett äldre fluorescerande mikroskop. Fördelen är att fluorescensen är stark vid låg förstoring, men nackdelen är att fluorescensen minskar med ökningen av förstoringen. Därför är det bättre att observera större provmaterial.
2. Epi-fluorescensmikroskop är en ny typ av fluorescensmikroskop som utvecklats i modern tid. Skillnaden är att excitationsljuset faller från objektivlinsen till ytan av provet, det vill säga samma objektivlins används som belysningskondensorn och objektivlinsen för att samla fluorescens. En dikroisk stråldelare måste läggas till i ljusvägen, som är 45 grader bort från ljusuranet. Excitationsljuset reflekteras in i objektivlinsen och samlas på provet. Fluorescensen som genereras av provet och excitationsljuset som reflekteras av linsens yta på objektivlinsen och täckglasytan kommer in i objektivlinsen samtidigt och återgår till tvåfärgsstråledelaren för att göra excitationsljuset separerat från fluorescensen , absorberas resterande excitationsljus av blockerande filter. Som att byta till en kombination av olika excitationsfilter/tvåfärgade stråldelare/blockerande filter, kan det möta behoven hos olika fluorescerande reaktionsprodukter. Fördelen med denna typ av fluorescensmikroskop är att belysningen av synfältet är enhetlig, avbildningen är tydlig och ju större förstoring desto starkare fluorescens.
(2) Hur man använder fluorescensmikroskopet.
1. Slå på ljuskällan och kvicksilverlampan med ultrahögt tryck måste värmas upp i några minuter för att nå den ljusaste punkten.
2. Transmissionsfluorescensmikroskopet måste installera det nödvändiga excitationsfiltret mellan ljuskällan och kondensorn, och installera motsvarande blockeringsfilter bakom objektivlinsen. Epifluorescensmikroskop måste sätta in det nödvändiga excitationsfilter/dubbelfärgade stråldelare/blockerande filterinsatserna i spåren i ljusvägen.
3. Observera med en lins med låg förstoring och justera mitten av ljuskällan så att den är placerad i mitten av hela belysningspunkten enligt justeringsanordningen för olika modeller av fluorescensmikroskop.
4. Placera provbiten och observera efter fokusering. Var uppmärksam under användning: observera inte direkt med ändfiltret, för att inte orsaka ögonskador; vid observation av prover med en oljelins måste en speciell oljelins utan fluorescens användas; efter att högtryckskvicksilverlampan har släckts kan den inte tändas omedelbart igen, den måste testas. Den kan startas om efter 5 minuter, annars blir den instabil och påverkar kvicksilverlampans livslängd.
(3) Observera cellerna färgade med 0,01 procent akridin orange fluorescerande färg under det fluorescerande mikroskopet på undervisningsplattformen med ett blåviolett ljusfilter. Kärnan och cytoplasman är exciterade för att producera två olika färger av fluorescens (mörkgrön och orange-röd).
