Fluorescensmikroskopi Tekniska parametrar Fluorescensmikroskopi Tekniker och metoder
Fluorescensmikroskop Tekniska parametrar 1. Vidvinkelokular 2. Akromatisk objektivlins 3. Objektivlinskonverterare med fyra hål 4. Epifluorescerande enhet Blå (B) Grön (G) excitationssystem 100W kvicksilverlampa 5. Koaxial mekanism för grov- och finfokusjustering: justering Fokusområde: 15 mm Mikrorörelserastervärde: 0,002 mm 6. Mekaniskt bord med två lager Längsgående rörelseområde: 70 mm Sidorörelseområde: 50 mm
Tekniska parametrar för fluorescensmikroskop
1. Vidvinkelokular
2. Akromatisk objektivlins
3. Nosstycke med fyra öppningar
4. Epifluorescensenhet blå (B) grön (G) excitationssystem 100W kvicksilverlampa
5. Koaxial mekanism för grov- och finfokusjustering: fokusområde 15 mm rutnät för finrörelser 0.002 mm
6. Dubbellagers mekanisk arbetsbänk
Vertikalt rörelseområde: 70 mm Sidorörelseområde: 50 mm
Fluorescensmikroskopi färdigheter och metoder
(1) Glasskiva
Tjockleken på glasskivan ska vara mellan 0,8 och 1,2 mm. Ett objektglas som är för tjockt kommer å ena sidan att absorbera mer ljus, och å andra sidan kan excitationsljuset inte koncentreras på provet. Objektglasen måste vara släta, enhetliga i tjocklek och fria från uppenbar autofluorescens. Ibland används diabilder av kvartsglas.
(2) Täckglas
Tjockleken på täckglaset är cirka 0.17 mm, slät. För att stärka excitationsljuset kan man även använda ett interferentäckglas, vilket är ett speciellt täckglas belagt med flera lager av ämnen (som magnesiumfluorid) som har olika störeffekter på ljus av olika våglängder, vilket kan göra att fluorescens går smidigt. Exciterande ljus passerar igenom och reflekteras, och detta reflekterade excitationsljus exciterar provet.
(3) Prov
Vävnadsskivor eller andra prover bör inte vara för tjocka. Om den är för tjock kommer det mesta av excitationsljuset att förbrukas i den nedre delen av provet, medan den övre delen som direkt observeras av objektivlinsen inte kommer att vara helt exciterad. Dessutom påverkar cellöverlappning eller föroreningsskydd bedömningen.
(4) Monteringsmedel
Glycerin används vanligtvis som monteringsmedel, som inte får ha någon autofluorescens, färglöst och transparent, och fluorescensens ljusstyrka är ljusare vid pH 8.5-9.5, och det är inte lätt att blekna snabbt. Därför används vanligtvis en lika stor blandning av glycerol och 0.5mol/l karbonatbuffertlösning med ett pH på 9.0 till 9.5 som monteringsmedel.
(5) spegelolja
Generellt gäller att när man observerar prover med mörkfältsfluorescensmikroskop och oljeimmersionslinser måste immersionsolja användas. Det är bäst att använda speciell icke-fluorescerande immersionsolja. Ovanstående glycerin kan också användas istället, och flytande paraffin kan också användas, men brytningsindexet är lågt, vilket har en liten inverkan på bildkvaliteten. Inflytande.
Principen och strukturella egenskaper hos fluorescensmikroskop
Fluorescensmikroskopi använder en punkt med hög ljuseffektivitet för att avge ljus med en viss våglängd (som ultraviolett ljus 3650 tum eller lila blått ljus 4200 tum) genom filtersystemet som excitationsljus för att excitera de fluorescerande ämnena i provet för att avge fluorescens av olika färger Efter det, observera genom förstoringen av objektivlinsen och okularet. På så sätt, under stark kontrastbakgrund, även om fluorescensen är mycket svag, är den lätt att identifiera och har hög känslighet. Det används främst för forskning av cellstruktur och funktion och kemisk sammansättning. Grundstrukturen för ett fluorescensmikroskop är sammansatt av ett vanligt optiskt mikroskop plus några tillbehör (som en fluorescerande ljuskälla, ett excitationsfilter, en tvåfärgad stråldelare och ett blockerande filter, etc.). Fluorescerande ljuskälla – använd vanligen ultrahögtryckskvicksilverlampa (50-200W), som kan avge ljus med olika våglängder, men varje fluorescerande ämne har en excitationsvåglängd som producerar den starkaste fluorescensen, så ett excitationsfilter ( Generellt, det finns ultravioletta, lila, blåa och gröna excitationsfilter), som endast tillåter excitationsljus av en viss våglängd att passera genom och bestråla provet, samtidigt som det absorberar annat ljus. Efter att varje ämne har bestrålats med excitationsljus avger det synlig fluorescens med en längre våglängd än bestrålningsvåglängden på mycket kort tid. Fluorescens är specifik och generellt svagare än excitationsljus. För att observera specifik fluorescens måste blockering (eller undertryckning) läggas till bakom objektivlinsen och användas tillsammans med den.
Skillnaden mellan fluorescensmikroskop och vanligt mikroskop
1. Belysningsmetoden är vanligtvis episkopisk, det vill säga ljuskällan projiceras på provet genom objektivlinsen;
2. Ljuskällan är ultraviolett ljus, våglängden är kortare och upplösningen är högre än för vanliga mikroskop;
3. Det finns två speciella filter, det ena framför ljuskällan används för att filtrera bort synligt ljus, och det mellan okularet och objektivlinsen används för att filtrera bort ultravioletta strålar för att skydda det mänskliga ögat.
Fluorescensmikroskop är också ett slags optiskt mikroskop, den största skillnaden är att excitationsvåglängden för de två är olika. Detta bestämmer skillnaden mellan fluorescensmikroskopet och det vanliga optiska mikroskopet vad gäller struktur och användning.
Fluorescensmikroskopi är ett viktigt verktyg i immunfluorescerande cytokemi. Den är sammansatt av huvudkomponenter som ljuskälla, filterplattesystem och optiskt system. Det är att använda en viss våglängd av ljus för att excitera provet för att avge fluorescens, och att observera fluorescensbilden av provet genom att förstärka objektivlinsen och okularsystemet.
