Hur man väljer rätt fluorescensmikroskop
Fluorescensmikroskop är en standardmikroskopisk avbildningsutrustning för laboratorier och patologiavdelningar. Den använder fluorescensegenskaper för observation och avbildning. Det används ofta inom cellbiologi, neurobiologi, botanik, mikrobiologi, patologi, genetik och andra områden. Fluorescensavbildning har fördelarna med hög känslighet och hög specificitet, och är mycket lämplig för observation av fördelningen av specifika proteiner och organeller i vävnader och celler, studiet av kolokalisering och interaktion, spårning av livsdynamiska processer såsom förändringar i jonkoncentrationen , etc.
Val av mikroskop
Fluorescensmikroskop är huvudsakligen indelade i tre kategorier: upprättstående fluorescensmikroskop (lämpliga för sektionering), inverterade fluorescensmikroskop (lämpliga för levande celler, med hänsyn till sektionering), stereoskopiska fluorescensmikroskop (lämpliga för större exemplar, såsom växter, zebrafiskar (vuxna/vuxna) embryo), medaka, mus/råtta organ, etc.).
Val av fluorescensfilterkuber
Förutom att överväga excitations- och emissionsvåglängderna för fluorescerande prober, måste valet av filterblock också överväga om det finns ospecifik excitation och korsfärg för flerfärgsmärkta prover. I experimentet ska vi försöka välja den våglängd som ligger närmast excitationstoppen för excitation, och mottagningsområdet måste inkludera emissionstoppen. Excitationstoppen för Alexa Fluor 488 är till exempel 500nm, och ett 480/40 excitationsfilter kan väljas i ett fluorescensmikroskop. Fluorescensfilterkuber som vanligtvis används i fluorescensmikroskop kan delas in i två typer: långpass (LP för kort) och bandpass (BP för kort), som också måste väljas efter behov.
Val av fluorescerande ljuskälla
För närvarande vanliga fluorescerande ljuskällor inkluderar kvicksilverlampor, metallhalogenlampor och LED-ljuskällor som har utvecklats snabbt de senaste åren. Den fluorescerande ljuskällans spektrum är kontinuerligt och diskontinuerligt, och energin kommer att vara olika i olika band. På grund av dess relativt smala spektralband, mer stabil energiproduktion, lång livslängd, säkerhet och miljöskydd och många andra fördelar, blir LED-ljuskällan gradvis den huvudsakliga ljuskällan för fluorescensmikroskop.
konfokalmikroskop
I traditionell fluorescensmikroskopobservation, på grund av överlappning av fluorescerande markörsubstanser och autofluorescensstrukturer, är de nära kombinerade, medan den traditionella epifluorescensmikroskopobjektivlinsen inte bara samlar upp ljus från fokalplanet utan också samlar upp spritt ljus ovanför och under fokalplan , vilket resulterar i kraftigt reducerad bildupplösning och kontrast.
Konfokal avbildning löser detta problem genom att endast detektera den del av ljuset som reflekteras från fokalplanet. Ljuskällan passerar genom ett nålhål för att bilda en liten och fin ljusfläck på fokalplanet. Ljuset som sänds ut från fokalplanet samlas upp av objektivlinsen. Det mesta av fluorescensen som emitteras från punkten ovanför eller under objektivlinsens fokalplan kan inte konvergera till det lilla hålet. Endast fluorescensen i fokalplanet och en liten del av fluorescensen som inte är i fokus kan passera genom hålet, medan ljusstrålarna utanför fokalplanet konvergerar på fram- eller baksidan av hålplattan och blockeras från att komma in i detektorn genom nålhålet. Den detekterade bilden är bilden från fokalplanet, så den slutliga bildkvaliteten förbättras avsevärt.
På grund av fördelarna och användbarheten av funktionerna hos laserskanningskonfokalmikroskopet är det konfokala mikroskopet en oumbärlig experimentell assistent inom cellbiologi, botanik och cellforskning med hög precision. Samtidigt, i det framtida vetenskapliga forskningscentret, kommer det att vara det mest grundläggande och centrala vetenskapliga forskningsverktyget.
