Kunskap om konfokal fluorescensmikroskopi
Grundprincipen för konfokal fluorescensmikroskopi: en punktljuskälla används för att bestråla provet och en väldefinierad liten ljusfläck bildas på fokalplanet. består av splitters. Stråldelaren skickar fluorescensen direkt till detektorn. Det finns ett nålhål framför ljuskällan och detektorn, respektive kallat belysningshålet och detektionshålet. Den geometriska storleken på de två är densamma, ungefär 100-200nm; i förhållande till ljuspunkten på fokalplanet är de två konjugerade, det vill säga ljuspunkten passerar genom en serie linser och kan slutligen fokuseras på belysningsnålhålet och detektionsnålhålet samtidigt. På detta sätt kan ljuset från fokalplanet konvergeras inom detektionshålets omfång, medan det spridda ljuset från ovan eller under fokalplanet blockeras utanför detektionshålet och inte kan avbildas. Lasern skannar provet punkt för punkt, och fotomultiplikatorröret efter detektering av pinhole erhåller också den konfokala bilden av motsvarande ljus punkt för punkt, som omvandlas till en digital signal och överförs till datorn och slutligen aggregeras till en klar konfokal bild av hela fokalplanet på skärmen.
Varje fokalplansbild är faktiskt ett optiskt tvärsnitt av provet, och detta optiska tvärsnitt har alltid en viss tjocklek, även känt som en optisk tunn sektion. Eftersom ljusintensiteten vid brännpunkten är mycket större än den vid icke-fokuspunkten, och ljuset i icke-fokalplanet filtreras av nålhålet, är skärpedjupet för det konfokala systemet ungefär noll, och scanning längs Z -axel kan realisera optisk tomografi, som bildar en observera den tvådimensionella optiska sektionen på den fokuserade platsen av provet. Genom att kombinera XY-plan (fokalplan) skanning med Z-axel (optisk axel) skanning, kan den tredimensionella bilden av provet erhållas genom att ackumulera tvådimensionella bilder av kontinuerliga lager och bearbetas med speciell datorprogramvara.
