Tjocklekskrav för optiska mikroskop för objektglas
Mikroskopisk uttorkning och provfästning: På grund av upprepad centrifugering går cellerna förlorade, så det är bäst att fästa cellerna på ytan av en glasskiva eller plastskiva för optisk mikroskopi, så att cellerna dehydreras och torkas tillsammans med glaset rutschkana eller plastduk. Krav på tjocklek på objektglas i optisk mikroskopi För att celler ska kunna fästa på objektglas eller plastskivor är det nödvändigt att först lägga ett lager film på objektglas eller plastskivor. Metoden för att lägga filmen är som följer:
(1) Den enklaste metoden för optisk mikroskopi är att lägga ett tunt lager av polyvinylformell (formvar) film. Blötlägg de rengjorda objektglasen i (0.5-1) procent polyvinylformell kloroformlösning. Efter att atmosfären förflyktigat visas en vit film på objektglasen. Skaka objektglasen flera gånger i kloroformen för att få filmen att ändras. Tunn och redo att användas.
(2) Släpp 0.1 latitud poly-L-lysin (lös upp 1 mg poly-lysin i 1 ml filtrerat vatten under beredningen) på den rengjorda glasskivan och lägg den i en 450C tillförsellåda efter att droppen vecklats ut . torr. Denna metod är bäst eftersom poly-L-lysin är positivt laddat, vilket gör att fler negativt laddade ytceller kan fästa.
(3) Tillsätt plasma och glycerol till destillerat vatten i förhållandet (30--40) procent och (3-5) procent enligt kraven i det optiska mikroskopet för tjockleken på objektglaset för att bilda ett glycerolprotein lösning. Vätskan droppas på det rengjorda objektglaset, viks ut och torkas under det optiska mikroskopet. Den lagda proteinfilmen nedsänks i 2 procent glutaraldehyd för att fixera proteinet, tvättas och torkas för senare användning. Före användning tappas plasman på proteinfilmen Gör den "aktiverad", skölj med buffert efter 30 minuter, och den kan appliceras direkt.
De fixerade och rengjorda cellerna görs till en lämplig koncentration av cellsuspension med filtrerat vatten under ett digitalt mikroskop, och det optiska mikroskopet placeras på en glasskiva eller plastskiva som har täckts med ett membran och placeras i en fuktig, låg temperatur (40C) miljö ( 30-120) minuter så att cellerna kan fästa vid membranet. Använd en fin pincett för att plocka upp objektglaset och skaka det i rent dubbeldestillerat vatten och tvätta bort obundna celler med ett optiskt mikroskop. Krav på tjockleken på objektglas i optiska mikroskop Polariserande mikroskop placeras sedan snabbt i ett kärl fyllt med 50 procent aceton (eller etanol). Dehydreringsprocessen är att lägga objektglasen i aceton eller etanol med ökande koncentration var 3:e minut, och det optiska mikroskopet eller kontinuerligt öka koncentrationen av dehydratiseringsmedlet i objektglasbehållaren. Enligt författarens laboratorieerfarenhet är den senare operationen mer bekväm. Den specifika metoden för optisk mikroskopi kan suga ut hälften av dehydratiseringsmedlet i behållaren var 3:e minut och sedan tillsätta en lika stor mängd torkmedel med en koncentration på 100 procent. Efter 5-6 operationer når koncentrationen av dehydratiseringsmedlet i mikroskoppriskärlet över 0,5 procent och cellerna dehydreras framgångsrikt. Efter torkning på en kritisk punkt limmas objektglaset eller plastskivan på provpiren med ledande lim för metallbeläggning. Det finns också bekvämligheter för att fästa celler till membran som fastställs med den tredje metoden. Optiskt mikroskop kan hänga cellerna fixerade med låg koncentration av glutaraldehyd på den "aktiverade" proteinfilmen. Det optiska mikroskopet kräver att tjockleken på objektglaset placeras i 10 minuter, och objektglaset eller plastskivan är indränkt i 2 procent glutaraldehyd. Efter 30 minuter, skölj med filtrerat dubbeldestillerat vatten och torka sedan av, torka och metallbelägg enligt ovanstående metod.
