PH-mätare - Bestämning och justering av medium pH
Alla mikroorganismer påverkas av pH i miljön där de lever. Ofta begränsar närvaron av selektiva arter pH-intervallet där de växer. Ibland kan surheten eller alkaliniteten i mediet också fungera som en tillväxtselektionsfaktor. För biokemiska testmedier är dock pH-intervallet i vilket mikroorganismer uppvisar tk-aktivitet i substratet snävare än pH-intervallet som krävs för tillväxt: därför är det viktigt att justera mediets pH till det förväntade området. När laboratoriet förbereder mediet enligt mediets sammansättning måste pH kontrolleras och justeras. Det måste påpekas att även för det färdiggjorda syntetiska dehydratiserade mediet som tillhandahålls av tillverkaren (särskilt för något dehydratiserat lagermedium), måste det slutliga pH-värdet mätas efter att experimentmediet tillverkats.
Det mest exakta sättet att mäta ett mediums pH är med en pH-mätare. Före användning måste den kalibreras med en standardbuffertlösning med känt pH (vanligtvis är pH 4 till 7). Skölj pH-mätarens elektrod med destillerat vatten och doppa ner den i odlingsmediet i bägaren, och läs sedan av odlingsmediets pH från pH-mätarens skala. Varje tillverkare tillhandahåller detaljerade bruksanvisningar för varje typ av pH-mätare.
Vid beredning av odlingsmediet kan PH enkelt justeras med hjälp av en pH-mätare med mekanisk omrörning. Odlingsmediet ska förberedas i en behållare (som en stor bägare) som kan röras om kontinuerligt. eller teflonlindade magneter. Det agarhaltiga mediets pH måste justeras efter upptining, vilket enkelt görs med en uppvärmningsbar magnetomrörare. När du justerar pH, använd en standardbuffertlösning med känt pH för att kalibrera pH-mätaren först. Sätt sedan kompositelektroden och motståndstermometern (om någon) i mediet, tillsätt långsamt lämplig mängd saltsyra och natriumhydroxid från änden av bägaren bort från elektroden, så att mediet kan nå och bibehålla det pH som krävs.
pH-mätarens temperaturkompensation bör ta hänsyn till temperaturens inverkan på elektrodsystemet: i vissa utspädningar och medier ändras pH avsevärt med temperaturen. För flytande media och spädningar kan pH vanligtvis justeras och mätas antingen vid 25 grader eller vid den temperatur som de används vid.
pH för agarmediet måste justeras efter upplösning, och upplösningstemperaturen är över 45 grader: därför bör pH för det fasta mediet bestämmas vid dess användningstemperatur. Vid denna tidpunkt bör en kompositelektrod med platt huvud användas, och pH-mätarens temperaturkompensation ska kalibreras manuellt. Vid beredning av odlingsmediet, om det fastställs att pH i odlingsmediet skiljer sig mellan smälttillstånd och stelnande tillstånd, betyder det att det finns ett fel vid justering av pH.
På samma sätt, när det preparerade mediet värmesteriliseras (t.ex. autoklaveras), kan det också genomgå pH-förändringar. För det dehydrerade mediet har tillverkaren tagit hänsyn till detta, och vanligtvis finns det inget behov av att justera pH, utan pH i mediet som ska användas bör kontrolleras noggrant. Om pH för det dehydratiserade agarmediet måste justeras under återupplösning eller beredning, är det bäst att justera det med filtersteriliserad saltsyra och natriumhydroxidlösning efter steriliseringssteget för att undvika bildandet av överhettning av mediet. Vid beredning av media med olika råvaror eller läkemedel måste mediets pH kontrolleras efter autoklavering. Dessutom, om pH-värdet i mediet visar sig ändras efter varje autoklav, kan pH-värdet justeras på lämpligt sätt när mediet bereds. Det är dock fortfarande nödvändigt att bestämma mediets slutliga pH efter sterilisering.
