Principer och strukturella egenskaper hos fluorescensmikroskop
Fluorescensmikroskopet använder en punkt med hög ljuseffektivitet för att avge ljus med en viss våglängd (såsom ultraviolett ljus 3650 eller violett-blått ljus 4200) genom färgfiltersystemet som excitationsljus, och exciterar sedan de fluorescerande ämnena i provet för att emittera fluorescens med olika färger och observerar dem sedan genom förstärkningen av objektivlinsen och okularet. På så sätt, under den starka kontrastbakgrunden, även om fluorescensen är mycket svag, är den lätt att identifiera och har hög känslighet. Det används främst för att studera cellstruktur och funktion och kemisk sammansättning. Den grundläggande strukturen för fluorescensmikroskop är sammansatt av vanligt optiskt mikroskop och vissa tillbehör (som fluorescerande ljuskälla, excitationsfilter, dikroisk stråldelare och blockeringsfilter, etc.). Fluorescerande ljuskälla —— Ultrahögtryckskvicksilverlampa (50-200W) används vanligtvis, som kan avge ljus med olika våglängder, men varje fluorescerande ämne har en excitationsljusvåglängd som ger den starkaste fluorescensen, så det är nödvändigt att lägga till excitationsfilter (vanligtvis ultravioletta, lila, blåa och gröna excitationsfilter), så att endast en viss våglängd av excitationsljus överförs till provet och allt annat ljus absorberas. Efter att varje ämne har bestrålats med excitationsljus avger det synlig fluorescens längre än bestrålningsvåglängden på mycket kort tid. Fluorescens har specificitet, som i allmänhet är svagare än excitationsljus. För att observera den specifika fluorescensen är det nödvändigt att blockera (eller undertrycka) bakom objektivlinsen och måste användas tillsammans.
Skillnad mellan fluorescensmikroskop och vanligt mikroskop
1. Belysningsläget är vanligtvis episodisk, det vill säga ljuskällan projiceras på provet genom objektivlinsen;
2. Ljuskällan är ultraviolett ljus med kort våglängd och högre upplösning än vanligt mikroskop;
3. Det finns två specialfilter, det ena framför ljuskällan används för att filtrera bort synligt ljus, och det mellan okularet och objektivlinsen används för att filtrera bort ultraviolett ljus för att skydda människors ögon.
Fluorescensmikroskop är också ett slags optiskt mikroskop, den största skillnaden är att deras excitationsvåglängder är olika. Detta bestämmer skillnaden mellan fluorescensmikroskop och vanligt optiskt mikroskop i struktur och användning.
Fluorescensmikroskop är det grundläggande verktyget för immunfluorescenscytokemi. Den består av ljuskälla, filterplattasystem och optiskt system. Den använder ljus med en viss våglängd för att excitera provet för att avge fluorescens, och förstorar det genom objektivlinsen och okularsystemet för att observera fluorescensbilden av provet.
