Färdigheter och metoder för att använda fluorescensmikroskop
Tekniska parametrar för fluorescensmikroskop 1. Vidvinkelokular 2. Akromatiskt objektiv 3. Objektivomvandlare med fyra hål 4. Emitterande fluorescensenhet blå (b) grön (g) excitationssystem 100W kvicksilverlampa 5. Koaxial grov mikrofokuseringsmekanism: fokuseringsområde 15 mm, mikrorutnätsvärde 0,002 mm 6. Längsgående rörelseområde för dubbelskikts mekanisk arbetsbänk: 70 mm, rörelseområde i sidled: 50 mm.
Färdigheter och metoder för att använda fluorescensmikroskop
(1) glasskiva
Skivans tjocklek ska vara mellan 0.8-1,2 mm och 1,2 mm. Ett för tjockt objektglas kommer inte att absorbera mycket ljus å ena sidan och kommer inte att göra att excitationsljuset samlas på provet å andra sidan. Objektglaset måste vara slätt, enhetligt i tjocklek och fritt från uppenbar spontan fluorescens. Shi Ying-glasbilder behövs ibland.
(2) Täckglas
Täckglaset är cirka 0.17 mm tjockt och slätt. För att förstärka excitationsljuset kan även interferenstäckglas användas, vilket är ett slags specialtäckglas med flera lager av ämnen (som magnesiumfluorid) som har olika interferenseffekter på ljusets olika våglängder. Det kan få fluorescensen att passera smidigt och reflektera excitationsljuset, och detta reflekterade excitationsljus kan excitera provet.
(3) Prover
Vävnadssektioner eller andra prover bör inte vara för tjocka. Om det är för tjockt förbrukas det mesta av excitationsljuset i den nedre delen av provet, medan den övre delen som direkt observeras av objektivlinsen inte är helt exciterad. Dessutom påverkar cellöverlappning eller föroreningsmaskering omdömet.
(4) tätningsmedel
Glycerol används vanligtvis som tätningsmedel, som måste vara färglöst och transparent utan spontan fluorescens. Ljusstyrkan av fluorescens är ljus vid pH 8,5 ~ 9,5, och det är inte lätt att blekna snabbt. Därför används ofta motsvarande blandning av glycerol och 0,5 mol/l PH9.0 ~ 9,5 karbonatbuffert som tätningsmedel.
(5) spegelolja
I allmänhet måste spegelolja användas vid observation av prover med mörkfältsfluorescensmikroskop och oljespegel. Det är bäst att använda speciell icke-fluorescerande spegelolja, eller ovanstående glycerin kan användas istället. Flytande paraffin kan också användas, men brytningsindexet är lågt, vilket har en liten inverkan på bildkvaliteten.
