Färgningstekniker och mikroskopisk observation av mikroorganismer
Enkel färgning av bakterier
1 Mål
1.1 Att lära sig de grundläggande teknikerna för mikrobiell utstryk och färgning.
1.2 Att behärska den enkla färgningsmetoden för bakterier.
1.3 Att lära känna bakteriers morfologiska egenskaper och att befästa inlärningen av användningen av oljespegel och aseptiska operationstekniker.
2 Princip Utstrykning och färgning av bakterier är en grundläggande teknik i mikrobiologiska experiment. Bakteriecellerna är små och genomskinliga, de är inte lätta att känna igen under det vanliga ljusmikroskopet och de måste färgas. Användningen av ett enda färgämne för att färga bakterierna, så att den färgade organismen och bakgrunden för att bilda en tydlig färgskillnad, så att deras morfologi och struktur kan observeras tydligare. Denna metod är lätt att utföra och lämpar sig för observation av organismens allmänna form och bakteriernas arrangemang. Alkaliska färgämnen används vanligtvis för enkel färgning, eftersom bakterieceller i neutrala, alkaliska eller svagt sura lösningar vanligtvis är negativt laddade, och när alkaliska färgämnen joniseras är den färgande delen av deras molekyler positivt laddad, så den färgande delen av alkaliska färgämnen kan lätt binda till bakterierna för att göra bakterierna färgade. De färgade bakteriecellerna kontrasterar skarpt mot bakgrunden och är lättare att känna igen under mikroskopet. Vanligt använda färgämnen för enkel färgning inkluderar merocyaninblått, kristallviolett och röd grundförening. När den bakteriella nedbrytningen av socker för att producera syra så att pH i mediet minskar, ökar den positiva laddningen av bakterierna, och kan sedan användas i röd, sur röd eller Kongorött och andra sura färgämnen färgning. Bakterierna måste fixeras innan färgning. Dess syfte är tvåfaldigt: det ena är att döda bakterierna och få bakterierna att fästa vid objektglaset; den andra är att öka dess affinitet för färgämnet. Två metoder används vanligtvis: uppvärmning och kemisk fixering. Försök att behålla den ursprungliga morfologin hos cellerna vid fixering.
3 Material
3.1 Stam Bacillus subtilis 12-18h näringsagar lutande kultur, Staphylococcus aureus ca 24h näringsagar slant kultur, Escherichia coli 24h näringsagar slant kultur, bagerijästagar lutande kultur.
3.2 Färg Lues alkaliska metylenblå färg (eller ammoniumoxalat kristallviolett färg), karbolsyraförening röd färg.
3.3 Instrument eller annan tillbehör Mikroskop, alkohollampa, objektglas, ympring, objektglashållare, dubbelskiktsflaska (fylld med cederolja och xylen), mikroskoppapper, fysiologisk saltlösning eller destillerat vatten, etc.
4 Procedur Smörj → torkning → fixering → färgning → tvätt → torkning → mikroskopisk undersökning.
5 steg
5.1 smeta Ta två rena och oljefria objektglas, var och en med en liten droppe saltlösning (eller destillerat vatten) i mitten av objektglaset under aseptiska förhållanden, med en inokuleringsring för att aseptiskt arbeta från Bacillus subtilis, Garcinia micrococcus. och Escherichia coli lutar för att plocka lite mossa i droppen vatten, blanda och belagd med en film. Om bakteriesuspensionen (eller flytande kulturen) smetar ut, kan användas för att ympa ringen plocka 2 till 3 ringar direkt på objektglaset. Observera att saltlösningen (destillerat vatten) och ta bakterierna bör inte vara för mycket och spridas jämnt, inte för tjock.
5.2 Torkning Torka naturligt i rumstemperatur. Den kan också torkas genom att värma den något över en spritlampa med den belagda sidan uppåt. Kom dock inte för nära lågan, eftersom temperaturen är för hög kommer att förstöra bakteriernas morfologi.
5.3 Fixering Om värmetorkning används kombineras fixering och torkning i ett enda steg på samma sätt som torkning. Smörj ut, torka och värmefixera.
5.4 Färgning Placera objektglaset plant på objektglashyllan, tillsätt 1 till 2 droppar färgningslösning på fläcken (färgningslösningen täcker precis utsmetningsfilmen är lämpligt). Färga smeten med Lü's Basic Mellanox Blue i 1~2min och med Carbonate Red (eller Ammoniumoxalat Crystal Violet) i ca 1min.
5.5 Sköljning Häll av färgningslösningen och skölj försiktigt med kranvatten från ena änden av objektglaset tills vattnet som rinner ner från fläcken är färglöst. När du sköljer, låt inte vattnet rinna direkt för att tvätta den belagda ytan. Vattenflödet bör inte vara för snabbt eller för stort för att undvika att utsmetningsfilmen lossnar.
5.6 Torkning Skaka av vattendropparna på objektglaset för att torka naturligt, föna eller absorberande papper kan användas för att absorbera torrt (var noga med att inte torka av bakteriekroppen). 5.7 Mikroskopisk undersökning Utstryket torkas och undersöks med mikroskopi. Utstryket måste vara helt torrt innan det kan observeras med ett oljemikroskop.
6 Resultat Rita morfologin för E. coli och Micrococcus garciniae efter enkelfärgning.
Gram fläck
1. Syfte
1.1 Att förstå principen för Gramfärgning och dess betydelse för klassificering och identifiering av bakterier.
1.2 Att lära sig och bemästra Gram-färgningstekniken och att konsolidera inlärningen av användningen av oljelinsen i ljusmikroskopet.
