Struktur och huvudkomponenter i ett fluorescensmikroskop
Fluorescensmikroskopi är ett viktigt verktyg i immunfluorescerande cytokemi. Den är sammansatt av huvudkomponenter som ljuskälla, filterplattesystem och optiskt system. Det är att använda en viss våglängd av ljus för att excitera provet för att avge fluorescens, och att observera fluorescensbilden av provet genom att förstärka objektivlinsen och okularsystemet.
Struktur och huvudkomponenter i ett fluorescensmikroskop
(1) Ljuskälla
Nuförtiden används ofta 200W ultrahögtryckskvicksilverlampor som ljuskällor. De är gjorda av kvartsglas, med en sfärisk form i mitten, och en viss mängd kvicksilver är fylld inuti. Under arbetet gör urladdningen mellan de två elektroderna att kvicksilver avdunstar, och lufttrycket i kulan stiger snabbt. När kvicksilvret är helt avdunstat kan det nå 50-70 standardatmosfärstryck, och denna process tar vanligtvis cirka 5-15 minuter. Luminescensen hos kvicksilverlampan med ultrahögt tryck är resultatet av emissionen av ljuskvanta under den kontinuerliga dissociationen och reduktionen av kvicksilvermolekyler genom urladdningen mellan elektroderna. Det avger starkt ultraviolett och blåviolett ljus, vilket räcker för att excitera olika fluorescerande ämnen, så det används ofta i fluorescensmikroskopi.
Ultrahögtryckskvicksilverlampor avger också mycket värme. Därför måste lamphuset ha goda värmeavledningsförhållanden och arbetsmiljötemperaturen bör inte vara för hög.
Den nya ultrahögtryckskvicksilverlampan kan tändas utan högspänning i början av användningen. Efter en tids användning måste den startas med hög spänning (ca 15000V). Efter start är underhållsarbetsspänningen i allmänhet 50-60V, och arbetsströmmen är cirka 4A. Medellivslängden för en 200W ultrahögtryckskvicksilverlampa är cirka 200 timmar om den används i 2 timmar varje gång. Ju kortare arbetstid, desto kortare livslängd. Om den bara används i 20 minuter kommer livslängden att minska med 50 procent. Minimera därför antalet starter när du använder den. Under användningen av glödlampan minskar dess ljuseffekt gradvis. Efter att lampan slocknat, vänta tills den svalnat innan du startar om. Stäng inte av glödlampan omedelbart efter att den har antänts, för att inte skada elektroden på grund av ofullständig kvicksilveravdunstning. I allmänhet måste den vänta i 15 minuter. På grund av det höga trycket från ultrahögtryckskvicksilverlampan och de starka ultravioletta strålarna måste glödlampan placeras i lampkammaren innan den kan antändas, för att inte skada ögonen och orsaka drift i händelse av en explosion .
Kretsen för ultrahögtryckskvicksilverlampan (100W eller 200W) ljuskälla och flera delar inklusive transformator, ballast och start. Det finns ett system för att justera glödlampans ljuscentrum i lampkammaren. En aluminiumpläterad konkav reflektor är installerad bakom glödlampan och en ljussamlande lins är installerad i fronten.
Den inhemska ultrahögtryckskvicksilverlampan GCQ-200 har bra prestanda och kan ersätta importerade glödlampor som HBO-200. Den genomsnittliga livslängden är mer än 200h och priset är relativt lågt.
En enkel och bärbar högfärgstemperatur brom volfram fluorescerande ljuskälla utvecklad i mitt land har liten storlek, låg vikt, låg effekt, AC och DC dubbelanvändning (med DC-strömförsörjning), lätt att bära, lätt att använda och har populariserats och tillämpats.
(2) Färgfiltersystem
Färgfiltersystemet är en viktig del av fluorescensmikroskopet, som består av en excitationsfilterplatta och en pressande filterplatta. Filterplattans modell och namnet på varje tillverkare är ofta inte enhetliga. Filterplattorna är i allmänhet uppkallade efter grundfärgen, bokstäverna framför representerar färgen, bokstäverna på baksidan representerar glaset och siffrorna representerar modellens egenskaper. olympus mikroskop
(3) Objektiv lins
Olika objektivlinser kan användas, men akromatiska objektivlinser används eftersom deras autofluorescens är minimal och deras ljustransmissionsegenskaper (våglängdsområde) är lämpliga för fluorescens. Eftersom fluorescensljusstyrkan för bilden i mikroskopets synfält är proportionell mot kvadraten på objektivlinsens bländarförhållande och omvänt proportionell mot dess förstoring, för att förbättra ljusstyrkan hos fluorescensbilden, är en objektivlins med en stor bländarförhållande ska användas. Speciellt vid hög förstoring är dess effekt mycket uppenbar. För prover med otillräcklig fluorescens bör därför en objektivlins med ett stort bländarförhållande användas med ett okular så lågt som möjligt (4×, 5×, 6,3×, etc.).
(4) Spegel
Reflektorns reflekterande skikt är i allmänhet aluminiumpläterat, eftersom aluminium absorberar mindre i det blåvioletta området av ultraviolett ljus och synligt ljus, och reflektionen är mer än 90 procent, medan reflektionen av silver bara är 70 procent. I allmänhet används en platt reflektor.
(5) Kondensor
Kondensorer avsedda för fluorescensmikroskopi är gjorda av kvartsglas eller annat UV-transparent glas. Det finns två typer av klarfältskondensatorer och mörkfältskondensatorer. Det finns också faskontrastfluorescenskoncentratorer.
(6) Epi-light-enhet
Den nya typen av epi-ljusanordning är att efter att ljuset från ljuskällan träffat det interferensspektroskopiska filtret reflekteras den korta våglängdsdelen (ultraviolett och lila blå) på grund av egenskaperna hos beläggningen på filtret. När filtret är vänt mot ljuskällan är vinkeln 45. När det lutar, skjuter det mot objektivlinsen vertikalt och skjuter mot preparatet genom objektivlinsen, så att preparatet exciteras. Vid denna tidpunkt fungerar objektivlinsen direkt som en ljusuppsamlare. Samtidigt är den långa delen av filtret (grön, gul, röd, etc.) transparent för filtret, så den reflekteras inte i objektivlinsens riktning, och filtret fungerar som en excitationsfilterplatta, eftersom fluorescensen av provet är i det långvågiga området för synligt ljus, kan passera genom filtret och nå okularet för observation, ökar ljusstyrkan på den fluorescerande bilden med ökningen av förstoringen och är starkare än det transmitterade ljuset källa med hög förstoring. Förutom funktionen hos en transmissionsljuskälla är den mer lämplig för direkt observation av ogenomskinliga och genomskinliga prover, såsom tjocka skivor, filtermembran, kolonier och vävnadsodlingsprover. De nya fluorescensmikroskop som utvecklats under de senaste åren använder mestadels epi-ljusanordningar, som kallas epifluorescensmikroskop.
