Mätning av mikrobiell kvantitet - mikroskopisk direkträkningsmetod!
Tillväxten av bakteriepopulationer kännetecknas av en ökning av antalet celler eller en ökning av cellulärt material. Det finns flera metoder för att mäta cellantal, inklusive direkt mikroskopisk räkning, plattantal, turbometri med spektrofotometer, mest troligt antal MPN och membranfiltrering. Metoderna för att mäta cellulära ämnen inkluderar mätning av celltorrvikt, mätning av innehållet av vissa komponenter i celler som kväve, RNA och DNA samt mätning av metaboliska produkter. Sammanfattningsvis finns det många metoder för att mäta mikrobiell tillväxt, var och en med sina egna för- och nackdelar, och urvalet bör baseras på specifika krav i arbetet. Detta experiment introducerar huvudsakligen den vanliga mikroskop-direkträkningsmetoden i produktion och vetenskapligt forskningsarbete.
Syfteskrav
1. Förtydliga principen för att använda en blodcellsräkningstavla för räkning.
2. Bemästra metoden att använda en blodcellsräkningstavla för mikrobiell räkning.
2, Grundläggande principer
Mikroskopisk direkträkningsmetod är en enkel, snabb och intuitiv metod för att direkt räkna en liten mängd suspension av ett prov under ett mikroskop genom att placera det på ett speciellt objektglas med en viss yta och volym (även känd som en bakterieräknare). För närvarande är vanliga bakterieräkningsanordningar hemma och utomlands, bland annat blodcellsräkningsplattor, Peteroff Hauser-bakterieräkningsanordningar och Hawksley-bakterieräkningsanordningar, som alla kan användas för att räkna suspensioner av jäst, bakterier, svampsporer, etc., med samma grundprincip. De två sistnämnda typerna av bakterieräknare har en total volym på {{0}},02 mm3 efter att ha täckts med ett täckglas, och avståndet mellan täckglaset och bärarglaset är endast 0,02 mm. Därför kan ett oljenedsänkningsobjektiv användas för att observera och räkna mindre celler som bakterier. Förutom att använda dessa bakterieräknare finns det även en uppskattningsmetod för att direkt observera förhållandet mellan utstrykningsarea och fältarea i mikroskop, som vanligtvis används för bakteriologisk undersökning av mjölk. Fördelarna med direkträkning med mikroskop är intuitiva, snabba och lätta att använda. Men nackdelen med denna metod är att de uppmätta resultaten vanligtvis är summan av döda och levande celler. För närvarande finns det några metoder som kan övervinna denna nackdel, såsom att kombinera levande cellfärgningskammarkultur (kort tid) och lägga till celldelningshämmare för att uppnå målet att endast räkna levande celler.
Använda en blodcellsräkningstavla som exempel för direkt räkning i mikroskop. Användningsmetoderna för de andra två bakterieräknarna finns i olika tillverkares manualer. Direkt räkning i mikroskop med hjälp av en blodcellsräkneplatta är en vanlig metod för mikrobiell räkning. Räknebrädan är en specialtillverkad glasrutschbana med fyra spår som bildar tre plattformar på den; Den bredare plattformen i mitten är uppdelad i två halvor av ett kort horisontellt spår, och det finns ett galler på varje sida av plattformen. Varje rutnät är uppdelat i nio stora rutnät, och det stora rutnätet i mitten är räknerummet. Strukturen för blodcellsräkningsplattan visas i figur l{{0}}. Räknerummets skala har i allmänhet två specifikationer. En är att en stor ruta är uppdelad i 25 mittersta rutor, och varje ruta är ytterligare uppdelad i 16 små rutor (Figur 15-2); En annan metod är att dela upp en stor ruta i 16 mittersta rutor, och varje ruta är ytterligare uppdelad i 25 små rutor. Men oavsett storleken på räknebrädan finns det 400 små rutor i varje stor ruta. Om sidolängden på varje kvadrat är 1 mm är arean på varje stor kvadrat lmm2. Efter täckning med täckglas är höjden mellan täckglaset och objektglaset 0,1 mm, så volymen på räknerummet är 0,1 mm3 (en tusendels milliliter). Figur 15-1 Struktur för blodcellsräkningstavla (I) Figur 15-2 Struktur för blodcellsräkningstavla (II) En vy framifrån; B. Vertikal snittvy; Det förstorade rutnätet har en stor fyrkant i mitten som räknelokal 1. Blodcellsräkningstavla; 2. Täckglas; Vid räkning i räknerummet beräknas vanligtvis det totala bakterieantalet för fem rutor, sedan erhålls medelvärdet för varje ruta, multiplicerat med 25 eller 16 för att få det totala bakterieantalet i en stor ruta, som sedan omvandlas till totalt bakterieantal i lml-bakterielösningen. Förutsatt att det totala bakterieantalet i fem kvadratiska rutnät är A och utspädningsfaktorn för bakterielösningen är B. Om det finns 25 räkneplattor i det kvadratiska rutnätet är det totala bakterieantalet i 1 ml bakterielösning A/5 × 25 × 104 × B=50000A · B. På liknande sätt, om det finns 16 räkneplattor i det kvadratiska rutnätet, är det totala bakterieantalet i 1mL bakterielösning A/5 × 16 × 104 × B=32000A · B
