Krav för beredning av fluorescerande mikroskopobjektglas
(1) Glasskiva
Skivans tjocklek ska vara mellan 0,8 och 1,2 mm. Om objektglaset är för tjockt kommer det å ena sidan att absorbera mer ljus, och å andra sidan kommer det inte att tillåta excitationsljuset att samlas på provet. Glasskivan måste vara slät, jämn i tjocklek och inte ha någon uppenbar spontan fluorescens. Ibland behövs kvartsglasglas.
(2) Täckglas
Tjockleken på täckglaset är cirka 0.17 mm och det är slätt. För att förstärka excitationsljuset kan även interferensskyddsglas användas. Detta är ett specialdesignat täckglas med flera lager av ämnen (som magnesiumfluorid) som har olika störningseffekter på ljus av olika våglängder. Det kan tillåta fluorescens att passera jämnt, medan reflektionsexcitationsljus kan excitera provet.
(3) Prov
Vävnadsskivor eller andra prover får inte vara för tjocka. Om de är för tjocka förbrukas det mesta av excitationsljuset i den nedre delen av provet, medan den övre delen som direkt observeras av objektivlinsen inte är helt exciterad. Dessutom kan cellöverlappning eller föroreningsmaskering påverka omdömet.
(4) Tätningsmedel
Glycerin används vanligtvis som monteringsmedel, som inte får ha någon spontan fluorescens, färglöst och transparent. Fluorescensljusstyrkan är relativt ljus vid pH 8.5-9.5 och är inte lätt att blekna bort snabbt. Därför används vanligtvis en lika stor blandning av glycerol och 0.5mol/L karbonatbuffert med pH 9.0-9.5 som tätningsmedel.
(5) Spegelolja
När ett mörkfältsfluorescensmikroskop och ett oljemikroskop används för att observera prover, måste spegelolja användas. Speciell icke-fluorescerande spegelolja kan användas, eller glycerol kan användas som ersättning. Flytande paraffin kan också användas, men brytningsindexet är lågt och har en liten inverkan på bildkvaliteten.
