Bestämning av mikrobiell population - direkt mikroskopisk räknemetod!
I. Syfteskrav
1, För att klargöra principen för hematokritplatträkning.
2, behärska metoden för mikrobiell räkning med hjälp av hematokritplatta.
II. Grundläggande principer
Mikroskop direkträkningsmetod är en liten mängd suspension av provet som ska testas på ett speciellt objektglas med en definierad yta och volym (även känd som den bakteriologiska räknaren), i mikroskopet direkt räknar en enkel, snabb, intuitiv metod. För närvarande är inhemska och utländska vanliga bakteriologiska räknare: blodcellsräknare, Peteroff-Hauser bakteriologiska räknare och Hawksley bakteriologiska räknare, etc., som kan användas för jäst, bakterier, mögelsporer och andra suspensioner av räkning, den grundläggande principen är samma. De två sistnämnda typerna av räknare har en total volym på 0.02mm3 efter att täckglaset lagts på, och avståndet mellan täckglaset och bärarskivan är endast 0,02mm, så mindre celler som t.ex. bakterier kan observeras och räknas med ett oljenedsänkningsobjektiv. Utöver användningen av dessa räknare finns det också en uppskattningsmetod för förhållandet mellan utstrykningsarea och synfältsyta som observeras direkt under mikroskopet, som vanligtvis används för bakteriologisk undersökning av komjölk. Fördelarna med den direkta mikroskopräkningsmetoden är intuitiv, snabb och enkel att använda. Nackdelen med denna metod är dock att resultatet vanligtvis är summan av döda och levande organismer. Det finns några metoder för att övervinna denna nackdel, såsom kombinationen av mikrokammarkultur med levande bakterier (kort tid) och tillsats av cytokineshämmare för att uppnå syftet att endast räkna levande organismer.
Driftsteg
1, Beredning av bakteriesuspension
Använd steril koksaltlösning för att göra bakteriesuspension av öljäst med lämplig koncentration.
2, spegelräkningskammare
Innan prover tillsätts bör räknekammaren på räkneplattan inspekteras först. Om det finns någon smuts måste den rengöras och torkas torr innan räkning.
3, Lägga till prover
Rengör och torka blodcellsräkningsplattan täckt med ett täckglas och använd sedan en steril kapillärbyrett för att skaka bryggjästsuspensionen från kanten av täckglaset för att släppa en liten droppe, så att bakterievätskan längs springan genom kapillärpenetrering i räknekammare automatiskt, i allmänhet kan räknekammaren fyllas med bakteriell vätska. Vid provtagning ska bakterielösningen skakas väl först; vid tillsats av prover bör räknekammaren inte ha luftbubblor.
4, Mikroskopräkning
Efter att ha tillsatt provet, låt det vila i 5 minuter, sätt sedan blodcellsräkneplattan på mikroskopets bärarsteg, hitta först platsen för räknekammaren med låg förstoring och ändra den sedan till hög förstoring för räkning. Justera intensiteten på mikroskopets ljus på lämpligt sätt, för mikroskopet med ett reflektorljus bör också vara uppmärksam på att ljuset inte bör vara förspänt åt ena sidan, annars är synfältet inte lätt att ta bort en räknekammarrutnätslinje, eller bara se den vertikala linjen eller bara se den horisontella linjen. Om bakterievätskan visar sig vara för tjock eller för tunn före räkning, är det nödvändigt att justera utspädningen igen innan räkning. Allmänna provspädningskrav på cirka 5 till 10 bakterier i varje cell är lämpliga. För varje räknekammare väljs organismerna i 5 mittfack (4 hörn och ett mittfack i mitten) ut för räkning. De organismer som finns på rutnätslinjerna räknas vanligtvis endast på de övre och högra linjerna. När det gäller jästknoppning, när den spirande kroppen når hälften av modercellens storlek, räknas den som två organismer. Räkna ett prov från de två räknekamrarna i medelvärdet för att beräkna bakteriehalten i provet.
5. Rengöring av hematokritplattan
Efter användning, skölj blodkroppsräkneplattan med vatten under kranen, använd inte hårda föremål för att tvätta och borsta, torka den själv eller använd en hårtork för att torka den efter tvätt. Inspektera plattan mikroskopiskt för att se om det finns några kvarvarande organismer eller andra utfällningar i varje fack. Om den inte är ren måste tvätten upprepas tills den är ren.
