Förbättra fördelarna med laserskannande multifotonmikroskopi
Laserskannande multifotonmikroskopi är en stor förbättring jämfört med optisk mikroskopi. Den kan observera den djupa strukturen av levande celler, fixerade celler och vävnader och kan erhålla tydliga och skarpa Z-planstrukturer i flera lager, det vill säga optiska sektioner, från vilka den kan konstruera den tredimensionella solida strukturen av provet. Konfokalmikroskopi använder en laserljuskälla som efter expansion fyller hela det bakre fokalplanet på objektivlinsen och passerar sedan genom objektivlinsens linssystem för att konvergera till en mycket liten punkt på provets fokalplan. Beroende på objektivlinsens numeriska bländare är diametern för den ljusaste belysningspunkten cirka 0.25 ~ 0.8μm, och djupet är cirka 0.5 ~ 1.5μm . Storleken på den konfokala fläcken beror på mikroskopets design, laservåglängd, objektivets egenskaper, skanningsenhetens statusinställningar och provets egenskaper. Fältmikroskopi har ett stort belysningsområde och djup, medan konfokalmikroskopi har en fokuserad belysning fokuserad på en brännpunkt i fokalplanet. Den mest grundläggande fördelen med konfokalmikroskopi är att den kan utföra fin optisk sektionering av tjocka fluorescerande prover (som kan nå 50 μm eller mer), och tjockleken på sektionerna är cirka 0,5 till 1,5 μm. En serie optiska snittbilder kan erhållas genom att flytta provet upp och ned med hjälp av mikroskopets Z-axelstegmotor. Insamlingen av bildinformation styrs inom planet och kommer inte att störas av signaler som sänds ut från andra platser på provet. Efter att ha tagit bort påverkan av bakgrundsfluorescens och ökat signal-brusförhållandet förbättras kontrasten och upplösningen av konfokala bilder avsevärt jämfört med traditionella fältbelysta fluorescensbilder. I många exemplar är många intrikata strukturella komponenter sammanflätade för att bilda komplexa system, men när tillräckligt många optiska sektioner kan samlas in kan vi rekonstruera dem i tre dimensioner genom programvara. Denna experimentella metod har använts i stor utsträckning inom biologisk forskning för att belysa de komplexa strukturella och funktionella förhållandena mellan celler eller vävnader.
