Att utvidga fördelarna med multiphoton -laserskanningsmikroskopi till att inkludera
Laserskanning av multiphotonmikroskop är en betydande förbättring av optisk mikroskopi, huvudsakligen manifesterad i förmågan att observera djupa strukturer av levande celler, fasta celler och vävnader och erhålla tydliga och skarpa multiläggs z-planstrukturer, nämligen optiska skivor, som kan användas för att konstruera tredimensionella fasta strukturer hos spekimenser. Konfokalt mikroskop använder en laserljuskälla, som utvidgas för att fylla hela fokalplanet för det objektiva linsen och sedan konvergeras till mycket små punkter på provets fokalplan genom linssystemet för objektivlinsen. Enligt den numeriska bländaren för objektivlinsen är diametern för den ljusa belysningspunkten ungefär 0. 25-0. 8 μm, och djupet handlar om 0. 5-1. 5 μm. Storleken på den konfokala punkten bestäms av mikroskopdesignen, laservåglängden, objektiva egenskaper, inställningar för skanningsenhet och provegenskaper. Belysningsområdet och djupet för ett fältmikroskop är stort, medan belysningen av ett konfokalt mikroskop är inriktat på en kontaktpunkt på fokalplanet. Den grundläggande fördelen med konfokal mikroskopi är att den kan utföra fin optisk sektionering på tjocka fluorescerande prover (upp till 5 0 μm eller mer), med en tjocklek av cirka 0,5 till 1,5 μm. Serien med optiska skivbilder kan erhållas genom att flytta provet upp och ner med hjälp av z-axelstegsmotorn i mikroskopet. Insamlingen av bildinformation styrs inom * * -planet, utan störningar från signaler som släpps ut från andra positioner på provet. Efter att ha tagit bort påverkan av bakgrundsfluorescens och ökat signal-till-brusförhållandet, förbättras kontrasten och upplösningen av konfokala bilder avsevärt jämfört med traditionella fältbelysningsfluorescensbilder. I många exemplar sammanflätas intrikata strukturella komponenter för att bilda komplexa system, men när tillräckligt med optiska avsnitt kan samlas in kan vi använda programvara för att rekonstruera dem i tre dimensioner. Denna experimentella metod har använts i stor utsträckning i biologisk forskning för att belysa de komplexa strukturella och funktionella förhållandena mellan celler eller vävnader.
