Hur fluorescensmikroskopi skiljer sig från konfokal lasermikroskopi
Fluorescensmikroskop
1. Ett fluorescensmikroskop använder ultraviolett ljus som en ljuskälla för att belysa föremålet som inspekteras för att få det att avge fluorescens, och sedan observera formen och placeringen av föremålet under mikroskopet. Fluorescensmikroskopi används för att studera absorption och transport av ämnen i celler, samt distribution och placering av kemiska ämnen. Vissa ämnen i celler, såsom klorofyll, kan fluorescera efter att ha blivit bestrålade av ultravioletta strålar; vissa ämnen kan inte själva fluorescera, men om de är färgade med fluorescerande färgämnen eller fluorescerande antikroppar kan de fluorescera efter bestrålning med ultravioletta strålar. Fluorescensmikroskopi är ett av verktygen för kvalitativ och kvantitativ forskning om sådana ämnen.
2. Principen för fluorescensmikroskop:
(A) Ljuskälla: Ljuskällan utstrålar ljus med olika våglängder (från ultraviolett till infrarött).
(B) Excitationsfilterljuskälla: överför ljus med en specifik våglängd som kan få provet att fluorescera, samtidigt som det blockerar ljus som är värdelöst för att stimulera fluorescens.
(C) Fluorescerande prover: Vanligtvis färgade med fluorescerande pigment.
(D) Blockerande filter: Blockerar excitationsljuset som inte absorberas av provet och överför selektivt fluorescens. Vissa våglängder i fluorescensen överförs också selektivt. Ett mikroskop som använder ultraviolett ljus som ljuskälla för att få det upplysta föremålet att fluorescera. Elektronmikroskopet monterades första gången 1931 i Berlin, Tyskland av Knorr och Hallowska. Detta mikroskop använder en höghastighetselektronstråle istället för en ljusstråle. Eftersom våglängden för elektronflödet är mycket kortare än ljusets, kan förstoringen av elektronmikroskopet nå 800,000 gånger, och den lägsta upplösningsgränsen är 0,2 nanometer. Svepelektronmikroskopet, som började användas 1963, låter människor se de små strukturerna på ytan av föremål.
3. Användningsområde: Används för att förstora bilder av små föremål. Används i allmänhet vid observation av biologi, medicin, mikroskopiska partiklar, etc.
konfokalmikroskop
1. Det konfokala mikroskopet lägger till en semireflekterande semi-lins till den optiska banan för det reflekterade ljuset, som bryter det reflekterade ljuset som har passerat genom linsen till andra riktningar. Det finns en baffel med ett nålhål i fokus, och nålhålet är placerat Vid brännpunkten, bakom baffeln, finns ett fotomultiplikatorrör. Man kan föreställa sig att det reflekterade ljuset före och efter detektionsljusfokuset passerar genom detta konfokala system och inte kan fokuseras på det lilla hålet och kommer att blockeras av baffeln. Så vad fotometern mäter är intensiteten av reflekterat ljus i fokus.
2. Princip: Traditionella optiska mikroskop använder fältljuskällor, och bilden av varje punkt på provet kommer att störas av diffraktion eller spritt ljus från intilliggande punkter; laserskanning konfokalmikroskop använder laserstrålar för att bilda punktljuskällor genom belysande pinholes för att belysa det inre av provet. Varje punkt i fokalplanet skannas och den upplysta punkten på provet avbildas vid detektionsnålhålet, som tas emot punkt för punkt eller linje för linje av fotomultiplikatorröret (PMT) eller kallkopplingsanordningen (cCCD) bakom detekteringen pinhole, och är snabbt En fluorescerande bild bildas på datorskärmen. Belysningsnålhålet och detektionsnålhålet är konjugerade i förhållande till objektivlinsens fokalplan. Punkter på fokalplanet är fokuserade på belysningsnålhålet och emissionsnålhålet samtidigt. Punkter utanför fokalplanet kommer inte att avbildas vid detektionsnålhålet. Detta erhålls Konfokala bilder är optiska tvärsnitt av prover som övervinner bristerna med suddiga bilder i vanliga mikroskop.
3. Användningsområden: Involverar medicin, djur- och växtvetenskaplig forskning, biokemi, bakteriologi, cellbiologi, vävnadsembryologi, livsmedelsvetenskap, genetik, farmakologi, fysiologi, optik, patologi, botanik, neurovetenskap, marinbiologi och materialvetenskap, elektronisk vetenskap , mekanik, petroleumgeologi, mineralogi.
