Förbättrade fördelar med laserskannande multifotonmikroskop
Laserskannande multifotonmikroskop är en betydande förbättring av optisk mikroskopi, främst manifesterad i förmågan att observera djupa strukturer av levande celler, fixerade celler och vävnader, och erhålla tydliga och skarpa fler-lager Z-plansstrukturer, nämligen optiska skivor, som kan användas för att konstruera tre-dimensionella solida strukturer. Konfokalmikroskop använder en laserljuskälla, som expanderas för att fylla hela fokalplanet av objektivlinsen, och sedan konvergeras till mycket små punkter på fokalplanet av provet genom objektivets linssystem. Enligt den numeriska bländaren på objektivlinsen är diametern för den ljusaste belysningspunkten cirka 0,25-0,8 μm och djupet är cirka 0,5-1,5 μm. Storleken på konfokalpunkten bestäms av mikroskopets design, laservåglängd, objektiva egenskaper, inställningar för skanningsenhetstillstånd och provets egenskaper. Belysningsomfånget och djupet för ett fältmikroskop är stort, medan belysningen av ett konfokalmikroskop är fokuserat på en brännpunkt på fokalplanet. Den grundläggande fördelen med konfokalmikroskopi är att den kan utföra fin optisk sektionering på tjocka fluorescerande prover (upp till 50 μm eller mer), med en tjocklek på cirka 0,5 till 1,5 μm. Serien av optiska skivbilder kan erhållas genom att flytta provet upp och ner med hjälp av mikroskopets Z--axelstegmotor. Insamlingen av bildinformation kontrolleras inom * *-planet, utan störningar från signaler som sänds ut från andra positioner på provet. Efter att ha tagit bort påverkan av bakgrundsfluorescens och ökat signal-brusförhållandet förbättras kontrasten och upplösningen av konfokala bilder avsevärt jämfört med traditionella fältbelysningsfluorescensbilder. I många exemplar vävs intrikata strukturella komponenter samman för att bilda komplexa system, men när tillräckligt många optiska sektioner kan samlas in kan vi använda programvara för att rekonstruera dem i tre dimensioner. Denna experimentella metod har använts i stor utsträckning inom biologisk forskning för att belysa de komplexa strukturella och funktionella förhållandena mellan celler eller vävnader.
