Beredning och observation av biologiska prover för elektronmikroskop
Upplösningen av ett mikroskop beror på våglängden på det ljus som används. Elektronmikroskopet, som kom fram 1933, uppnådde betydligt högre upplösning än ett optiskt mikroskop på grund av användningen av elektronstrålar med våglängder mycket kortare än synligt ljus som ljuskällor. De olika ljuskällorna bestämmer också en rad skillnader mellan elektronmikroskop och optiska mikroskop.
Baserat på skillnaderna i principerna för elektronstråleavbildning och de sätt på vilka de verkar på prover, har moderna elektronmikroskop utvecklats till många typer. För närvarande är de mest använda transmissionselektronmikroskop och svepelektronmikroskop. Den förra har en total förstoring som kan variera mellan 1000-10000000 gånger, medan den senare har en total förstoring som kan variera mellan 20-300000 gånger. Detta experiment introducerar huvudsakligen beredningen av två typer av mikroskopprover, transmissionselektronmikroskopi och svepelektronmikroskopi.
2, Utrustning
1. Stammen Escherichia coli är lutad.
2. Lösning eller reagens: pentylacetat, koncentrerad svavelsyra, vattenfri etanol, sterilt vatten, 2 % natriumfosfovolframat (pH 6,5-8,0) vattenlösning, 0,3 % polyvinylformaldehyd (upplöst i kloroform) lösning, pBR3, ammoniumacetat, 22plasmid.
3. Instrument eller andra verktyg inkluderar vanliga optiska mikroskop, kopparnät, porslinstrattar, bägare, petriskålar, sterila droppare, sterila pincett, stift, glasskivor, räkneplattor, vakuumbeläggningsmaskiner, torktumlare för kritiska punkter, etc.
3, Driftsteg
(1) Beredning och observation av prover för transmissionselektronmikroskopi
1. Behandling av metallnät
Provet från ett optiskt mikroskop placeras på ett objektglas för observation. Men i en transmissionsspegel, eftersom elektroner inte kan penetrera glasskivan, kan ett nätmaterial endast användas som bärare, vanligen kallat bärarnät. Bärarnätet kan delas in i olika specifikationer på grund av olika material och former, bland vilka kopparnät med 200-400 mesh (antal hål) vanligtvis används. Kopparnät bör behandlas före användning för att ta bort eventuell smuts och hålla den ren, annars kommer det att påverka kvaliteten på den stödjande filmen och klarheten på provfotona. Kopparnätet på 400 mesh som används i detta experiment kan behandlas med följande metod: blötlägg först och flyt med pentylacetat i några timmar, skölj sedan flera gånger med destillerat vatten och sänk till sist ner och flyt kopparnätet i vattenfri etanol för uttorkning. Om kopparnätet fortfarande inte är rent efter ovanstående metoder kan det blötläggas i utspädd koncentrerad svavelsyra (1:1) i 1-2 minuter, eller kokas i 1% NaOH-lösning i några minuter, sköljas flera gånger med destillerat vatten och sedan torkas i vattenfri etanol för senare användning.
