Beredning och observation av biologiska prover för elektronmikroskopi
Upplösningen av ett mikroskop beror på våglängden på ljuset som används. Elektronmikroskopet, som började dyka upp 1933, använder en elektronstråle med en våglängd som är mycket kortare än den för synligt ljus som ljuskälla, så att upplösningen det kan uppnå är avsevärt förbättrad jämfört med den för ett optiskt mikroskop. Skillnaden i ljuskällor bestämmer också en rad skillnader mellan elektronmikroskop och optiska mikroskop.
Enligt skillnaderna i principerna för elektronstråleavbildning och de olika sätten att verka på prover har moderna elektronmikroskop utvecklats till många typer. För närvarande är de mest använda transmissionselektronmikroskop och svepelektronmikroskop. Den totala förstoringen av den förra kan vara mellan 1000-1000000. Den totala förstoringen av den senare kan variera mellan 20 och 300,000 gånger. Detta experiment introducerar huvudsakligen beredningen av två typer av mikroskopprover, transmissionselektronmikroskop och svepelektronmikroskop.
2. Utrustning
1. Bakterier Escherichia coli (Escherichia coli) lutande.
2. Lösning eller reagens amylacetat, koncentrerad svavelsyra, absolut etanol, sterilt vatten, 2 % natriumfosfovolframat (pH 6.5-8.0) vattenlösning, 0,3 % polyeten formaldehyd (löslig i kloroform) lösning, celler Pigment c, ammoniumacetat, plasmid pBR322.
3. Instrument eller andra redskap: vanligt optiskt mikroskop, kopparnät, porslinstratt, bägare, fat, steril droppare, steril pincett, stift, objektglas, räknebräda, vakuumbeläggningsmaskin, kritisk punkttork, etc.
3. Driftsteg
(1) Provberedning och observation för transmissionselektronmikroskopi
1. Behandling av metallnät
Provet för optisk mikroskopi placeras på ett objektglas för observation. Men i transmissionselektronmikroskopi, eftersom elektroner inte kan penetrera glasskivan, kan nätmaterial endast användas som bärare, vanligtvis kallade bärarnät. Bärarnätet kan delas in i många olika specifikationer på grund av olika material och former, bland vilka det vanligaste är 200-400 nät (antal hål) kopparnät. Kopparnätet måste behandlas före användning för att ta bort smuts och hålla det rent, annars kommer det att påverka kvaliteten på stödfilmen och klarheten på provfotona. Detta experiment använder ett 400-mesh kopparnät, som kan behandlas enligt följande: först blötlägg och blek det med amylacetat i flera timmar, skölj det sedan med destillerat vatten flera gånger och blötlägg det sedan i absolut etanol i uttorkning. Om kopparnätet fortfarande inte är rent efter ovanstående metoder, kan du blötlägga det i utspädd koncentrerad svavelsyra (1:1) i 1 till 2 minuter, eller koka det i 1% NaOH-lösning i några minuter, skölj det med destillerat vatten flera gånger, och lägg det sedan i vattenfritt Dehydrera i etanol och ställ åt sidan.
2. Förberedelse av stödmembran
Vid observation av prover bör även bärnätet täckas med ett lager av ostrukturerad, enhetlig film, annars kommer små prover att läcka ut från hålen i bärnätet. Denna film brukar kallas stödfilm eller bärfilm. Stödfilmen bör vara elektrontransparent och dess tjocklek bör i allmänhet vara mindre än 20 nm; under inverkan av elektronstrålen bör filmen också ha en viss mekanisk hållfasthet för att upprätthålla strukturell stabilitet och ha god värmeledningsförmåga; Dessutom bör stödnätverket användas i elektronmikroskopi. Det bör inte finnas någon synlig struktur under, ingen kemisk reaktion med provet som bärs och ingen störning av observationen av provet. Dess tjocklek är vanligtvis cirka 15 nm. Stödfilmen kan vara plastfilm (såsom kollodiumfilm, polyetenformaldehydfilm etc.), kolfilm eller metallfilm (såsom berylliumfilm etc.). Under normala arbetsförhållanden kan plastfilm uppfylla kraven. Bland plastfilmer är kollodiumfilm relativt lätt att förbereda, men dess styrka är inte lika bra som polyetenformaldehydfilm.
