Flera anteckningar och tips för användning av faskontrastmikroskopi
Användning av faskontrastmikroskopi
1) Installera faskontrastanordningen: ta bort kondensorlinsen på det vanliga mikroskopet och installera kondensorlinsen med ett ringformigt membran på ett matchande mikroskop; ta bort den vanliga objektivlinsen i mikroskopet och ersätt den med en objektivlins med en fasplatta; ersätt okularet med fokuseringsokular för faskontrastmikroskop; speciella gröna filter (ibland inte nödvändigt) placeras vid ljuskällans ljusingång.
2) Ljusinriktning och fokus: Justera fokuseringsokularet och tjockleksjusteringsskruven tills en vit cirkel och en svart cirkel kan ses tydligt i synfältet. Den svarta cirkeln är fixerad, och den vita cirkeln kan flyttas genom att justera skruven på kondensoranordningen, så att den svarta cirkeln och den vita cirkeln sammanfaller helt. Ta av fokuseringsokularet och ersätt det med mikroskopets originalokular för att kontrollera.
Analys av problem vid användning av faskontrastmikroskop
1. Inverkan av provtjockleken Vid observation av faskontrast bör provets tjocklek vara 5 μm eller tunnare. När man använder ett tjockare prov är det övre lagret av provet mycket tydligt, men det djupa lagret blir suddigt och orsakar fasskiftningsinterferens. och ljusspridning.
2. Inverkan av täckglas och diaglas Provet måste täckas med ett täckglas, annars är den ljusa ringen på det ringformiga membranet och den mörka ringen på fasplattan svåra att överlappa. Faskontrastobservation ställer också höga krav på glaskvaliteten hos diaglas och täckglas. När det finns repor, ojämn tjocklek eller ojämnheter, uppstår ljus ringförvrängning och fasstörningar. Dessutom, när objektglaset är för tjockt eller för tunt, kommer den ljusa ringen på det ringformade membranet att bli större eller mindre.
3. Halo- och blekningseffekt I faskontrastmikroskopets avbildningsprocess, när en viss struktur blir mörk på grund av fasfördröjning, är det inte förlusten av ljus, utan resultatet av omfördelning av ljus på bildplanet. Så ljus som uppenbarligen går förlorat i mörka områden kommer att visas som en ljus gloria runt mörkare föremål. Detta är en nackdel med faskontrastmikroskopi, som hindrar observationen av fina strukturer, och halofenomenet är allvarligare när det ringformiga membranet är mycket smalt. Ett annat fenomen inom faskontrastmikroskopi är skuggningseffekten, som hänvisar till förlusten av kontrast vid kanterna av ett större område med samma fasfördröjning när det observeras av faskontrast.
4. Fasinversion När n'n är bildens ljusa och mörka kontrast precis motsatt, vilket kallas fasinversion. Det är oigenkännligt när fasskillnaden δ=0, och kontrasten blir större med ökningen av δ, och fasinversionen kommer att visas när δ fortsätter att öka till ett visst värde. När du använder en objektivlins med 90 procent högt absorbansvärde (hög kontrast) är detta transformationsvärde cirka 0.55λ, och när du använder ett objektiv med 70 procent standardabsorbansvärde är det cirka 0,33λ . Mål med högre absorbansvärden bör användas för att lösa mindre optiska vägskillnader.
