Skillnaden mellan laserkonfokalmikroskop och traditionellt optiskt mikroskop
Laserscanning konfokal fluorescensmikroskopi är ett relativt avancerat molekylär- och cellbiologisk analysinstrument som använder dator-, laser- och bildbehandlingsteknik för att erhålla tredimensionell data från biologiska prover. Det används främst för att observera strukturen hos levande celler och de biologiska förändringarna av specifika molekyler och joner, kvantitativ analys och kvantitativ bestämning i realtid.
Principen för laserkonfokalmikroskopi: använd belysningspinhålet placerat bakom ljuskällan och detektionsnålhålet placerat framför detektorn för att realisera punktbelysning och punktdetektering. Ljuset som emitteras från ljuskällan genom belysningsnålhålet fokuseras på en punkt på provets fokalplan, och den emitterade fluorescensen från denna punkt avbildas på detektionsnålhålet, och allt emitterat ljus utanför denna punkt blockeras av detekteringen nålhål. Belysningsnålhålet och detektionsnålhålet är konjugerade till den bestrålade punkten eller den detekterade punkten, så den detekterade punkten är konfokalpunkten och planet där den detekterade punkten är belägen är det konfokala planet.
Datorn visar de upptäckta punkterna på datorskärmen i form av bildpunkter. För att generera en komplett bild skannar skanningssystemet i den optiska banan i provets fokalplan för att generera en komplett konfokal bild. Så länge scenen rör sig upp och ner längs Z-axeln, flyttas ett nytt lager av provet till det konfokala planet och det nya lagret av provet avbildas på monitorn. Med den kontinuerliga rörelsen av Z-axeln kan kontinuerliga bilder av olika lager av provet erhållas. Ljusskuren bild.
Skillnaden mellan traditionella ljusmikroskop
Traditionella fluorescensmikroskop har en oöverstiglig brist: de fluorescerande strukturerna utanför fokalplanet är suddiga och suddiga. Anledningen är att de flesta biologiska exemplar har överlappande strukturer. Om de fluorescensmärkta strukturerna är fördelade på olika nivåer och överlappar varandra, tas den spridda fluorescensen från ovan eller under fokalplanet också emot av objektivlinsen, och upplösningen hos fluorescensmikroskopet kommer att förbättras avsevärt. minska.
På grundval av traditionella optiska mikroskop använder laserskanningskonfokalmikroskop laserljus som ljuskälla, antar principen och enheten för konjugerad fokusering och använder datorer för att utföra digital bildbehandling, observation, analys och utmatning av de observerade objekten. Provet kan skannas tomografiskt och avbildas för oförstörande observation och analys av den tredimensionella rumsliga strukturen hos celler. Samtidigt, med hjälp av immunofluorescerande märkning och jonfluorescerande märkningssonder, kan denna teknik inte bara observera fixerade celler och vävnadssektioner, utan också utföra dynamiska realtidsobservationer och detektion av struktur, molekyler, joner och livsaktiviteter hos levande celler, på subcellulär nivå Att observera fysiologiska signaler som Ca2 plus , pH-värde, membranpotential och förändringar i cellmorfologi har blivit en ny generation kraftfulla forskningsverktyg inom områdena morfologi, molekylär cellbiologi, neurovetenskap, farmakologi och genetik.
