Principerna för fluorescensmikroskopi och laserkonfokalmikroskopi
fluorescensmikroskop
1. Ett fluorescensmikroskop är en enhet som använder ultraviolett ljus som ljuskälla för att belysa föremålet som testas, vilket får det att avge fluorescens och sedan observera formen och placeringen av föremålet under mikroskopet. Fluorescensmikroskopi används för att studera absorption, transport, distribution och lokalisering av intracellulära substanser. Vissa ämnen i celler, som klorofyll, kan avge fluorescens efter att ha exponerats för ultraviolett strålning; Även om vissa ämnen inte själva kan avge fluorescens, kan de också avge fluorescens efter att de färgats med fluorescerande färgämnen eller fluorescerande antikroppar och bestrålats med ultraviolett ljus. Fluorescensmikroskopi är ett av verktygen för kvalitativ och kvantitativ forskning om dessa ämnen.
2. Principen för fluorescensmikroskop:
(A) Ljuskälla: Ljuskällan avger ljus med olika våglängder (från ultraviolett till infrarött).
(B) Ljuskälla för excitationsfilter: Transmitterar ljus med en specifik våglängd som kan producera fluorescens i provet, samtidigt som det blockerar ljus som är värdelöst för excitationsfluorescens.
(C) Fluorescerande prov: Vanligtvis färgat med fluorescerande pigment.
(D) Blockerande filter: överför selektivt fluorescens genom att blockera excitation som inte har absorberats av provet, och vissa våglängder överförs också selektivt i fluorescens. Ett mikroskop som använder ultraviolett ljus som ljuskälla för att avge fluorescens från bestrålade föremål. Elektronmikroskopet sattes ihop av Knorr och Harroska i Berlin, Tyskland 1931. Denna typ av mikroskop använder höghastighetselektronstrålar istället för ljusstrålar. På grund av elektronflödets mycket kortare våglängd jämfört med ljusvågor, kan förstoringen av elektronmikroskopet nå 800000 gånger, med en lägsta upplösningsgräns på 0,2 nanometer. Svepelektronmikroskopet, som började använda det 1963, låter människor se de små strukturerna på ytan av föremål.
3. Användningsomfång: Används för att förstora bilder av små föremål. Används vanligtvis för observation av biologi, medicin, mikroskopiska partiklar, etc.
konfokalmikroskop
1. Ett konfokalmikroskop lägger till en semireflekterande halvlins till den reflekterade ljusbanan, som böjer det reflekterade ljuset som redan har passerat genom linsen mot andra riktningar. Det finns en baffel med ett nålhål i sin brännpunkt, och det lilla hålet är placerat i brännpunkten. Bakom baffeln finns ett fotomultiplikatorrör. Man kan föreställa sig att det reflekterade ljuset före och efter detekteringsljusfokuspunkten inte kan fokuseras på det lilla hålet genom detta konfokala system, och kommer att blockeras av baffeln. Så vad fotometern mäter är intensiteten av reflekterat ljus vid brännpunkten.
2. Princip: Traditionella optiska mikroskop använder en fältljuskälla, och bilden av varje punkt på provet påverkas av diffraktion eller spritt ljus från intilliggande punkter; Laserskanningskonfokalmikroskopet använder en punktljuskälla som bildas av en laserstråle som passerar genom ett upplyst pinhole för att skanna varje punkt i provets fokalplan. Den upplysta punkten på provet avbildas vid sondens pinhole och tas emot punkt för punkt eller linje av fotomultiplikatorröret (PMT) eller termoelektriska kopplingsanordningen (cCCD) efter sondens pinhole, vilket snabbt bildar en fluorescerande bild på datorskärmen . Belysningsnålhålet och detektionsnålhålet är konjugerade i förhållande till objektivlinsens fokalplan. Punkterna på fokalplanet fokuseras samtidigt på belysningsnålhålet och emissionsnålhålet, och punkter utanför fokalplanet avbildas inte vid detektionsnålhålet. Detta resulterar i en konfokal bild som är det optiska tvärsnittet av provet, vilket övervinner nackdelen med suddighet i allmänna mikroskopbilder.
3. Användningsområden: involverar medicin, djur- och växtforskning, biokemi, bakteriologi, cellbiologi, vävnadsembryologi, livsmedelsvetenskap, genetik, farmakologi, fysiologi, optik, patologi, botanik, neurovetenskap, marinbiologi, materialvetenskap, elektronisk vetenskap, mekanik , petroleumgeologi och mineralogi.
