Den speciella strukturen hos ett fluorescensmikroskop inkluderar:
(I) Färgfiltersystem
Färgfilter är en viktig del av fluorescensmikroskopet, dess kärnkomponenter av excitationsljusfiltret (första barriärfiltret), emissionsljusfiltret (andra barriärfiltret) och halvtransparent och halvt anti-filter (stråledelande spegel) sammansättning . Olika tillverkare av färgfiltermodeller, namnet är ofta inte enhetligt.
1. Excitationsljusfilter och emissionsljusfilter: beroende på ljuskällan och fluorokromens egenskaper, välj vanligtvis följande tre typer av matchning, för att tillhandahålla ett visst våglängdsområde för excitationsljuset och göra provet excitation av fluorescens genom okularet till avbildningen.
UV-excitering: Excitationsljusfiltret tillåter överföring av UV-ljus och blockerar passagen av synligt ljus över 400nm. Motsvarande emissionsfilter tillåter passage av blått ljus, som ser blått ut i synfältet, t.ex. för DAPI-färgning.
Excitation av blått ljus: Excitationsljusfiltret tillåter blått ljus att passera igenom och blockerar andra ljusvåglängder. Motsvarande emissionsfilter tillåter passage av grönt ljus, t.ex. för GFP-färgningsmarkörer.
Grön excitation: Excitationsfiltret tillåter grönt ljus att passera igenom och blockerar andra våglängder. Motsvarande emissionsfilter låter vanligtvis rött ljus passera igenom, t.ex. Rhodamine-färgning.
2. Halvtransparent och halvreflekterande filter: dess roll är att helt blockera ljusets excitation genom reflektionen; och genom motsvarande våglängdsområde för det emitterade ljuset. Dess modell och excitation av ljusfilter och emission av ljusfilter motsvarar.
(B) objektivlins och okular
En mängd olika objektivlinser kan användas, men * bra val av symmetriska, akromatiska objektivlinser, på grund av dess autofluorescens är mycket liten och ljustransmissionsegenskaper (våglängdsområde) lämpliga för fluorescens. Eftersom bildens fluorescensljusstyrka i mikroskopets synfält är proportionell mot kvadraten av objektivets mynningshastighet och omvänt proportionell mot dess förstoring, så för att förbättra ljusstyrkan hos fluorescensbilden, bör objektivet med en hög mynningshastighet användas. Speciellt för fluorescensen är inte tillräckligt stark prover, bör använda en stor munhastighet, hög ljustransmission objektiv, med så låg som möjligt med okularet.
(C) andra optiska enheter
Reflektor, dess reflekterande skikt är i allmänhet aluminiumpläterat, eftersom aluminium på ultraviolett och synligt ljus absorption av blå-violett område mindre, reflekterar upp till 90% eller mer (medan reflektionsförmågan för silver är endast 70%). Platta reflektorer används vanligtvis. Spotlight-spegel, designad och tillverkad speciellt för fluorescensmikroskopi spotlight-spegel av kvartsglas eller annat UV-transparent glas. Fallande ljusanordning, som förutom funktionen av transmitterad ljuskälla, mer lämpad för opaka och genomskinliga prover, såsom tjock film, filtermembran, koloni, vävnadskultur och andra prover för direkt observation. Under de senaste åren har utvecklingen av en ny typ av fluorescensmikroskop med hjälp av fallande ljusanordning, som kallas fallande fluorescensmikroskop.
(D) ljuskälla
Numera används 50 eller 100W högtryckskvicksilverlampa som ljuskälla. Arbetet av de två elektroderna urladdas, orsakat av kvicksilveravdunstning, luftkulan stiger snabbt (denna process tar i allmänhet cirka 5 ~ 15 minuter), och i processen med emission av ljuskvanta är våglängden på det frigjorda ljuset tillräcklig för att excitera alla typer av fluorescerande ämnen används därför vanligtvis för fluorescensmikroskopi.
Kvicksilverlampor har en relativt kort livslängd, vanligtvis 200 timmar, och som svar på denna livslängdsbegränsning har en ny fluorescerande ljuskälla, X-Cite, använts i stor utsträckning för sin långa lamplivslängd på 2000 timmar och dess flexibla användning. - ingen förvärmning krävs, och den är redo att användas direkt ur lådan.
