Två vanligt använda mikroskopiska observationsmetoder
1, mörkfältsobservation
Mörkt synfält är faktiskt mörkt fältbelysning Dess egenskaper skiljer sig från ljust synfält, eftersom det inte direkt observerar det upplysande ljuset, utan snarare observerar det reflekterade eller diffrakterade ljuset från föremålet som inspekteras. Därför blir synfältet en mörk bakgrund, medan föremålet som inspekteras ger en ljus bild
Principen för mörkt fält är baserad på det optiska Tyndall-fenomenet, där dammpartiklar inte kan observeras av det mänskliga ögat när de utsätts för starkt ljus på grund av diffraktion orsakad av starkt ljus. Om ljuset projiceras snett på det, verkar partiklarna öka i volym på grund av ljusets reflektion, vilket gör dem synliga för det mänskliga ögat.
Det speciella tillbehöret som krävs för observation av mörka fält är en mörkfältsstrålkastare. Dess kännetecken är att den inte tillåter ljusstrålen att passera genom objektet från botten till toppen, utan ändrar ljusets bana så att den riktas snett mot objektet, så att belysningsljuset inte direkt kommer in i objektivlinsen, och använder den ljusa bilden som bildas av reflektionen eller diffraktionsljuset som finns i det mörka fältets yta av det observerade objektet i mycket högre upplösning än det observerade objektets upplösning. fältobservation, som når upp till 0,02-0,004
2, Faskontrastspegelinspektionsmetod
Den framgångsrika uppfinningen av faskontrastmikroskopi i utvecklingen av optiska mikroskop är en viktig prestation inom modern mikroskopiteknik. Vi vet att det mänskliga ögat endast kan särskilja ljusvågornas våglängd (färg) och amplitud (ljusstyrka). För färglösa och genomskinliga biologiska prover, när ljus passerar igenom, förändras inte våglängden och amplituden mycket, vilket gör det svårt att observera provet i ett ljust fält
Faskontrastmikroskopet använder skillnaden i optisk väglängd för objektet som inspekteras för spegelinspektion, och utnyttjar effektivt ljusstörningsfenomenet för att omvandla fasskillnaden som inte kan särskiljas av det mänskliga ögat till en urskiljbar amplitudskillnad. Även färglösa och transparenta ämnen kan bli tydligt synliga. Detta underlättar i hög grad observationen av levande celler, därför används faskontrastmikroskopi i stor utsträckning i inverterade mikroskop
Grundprincipen för faskontrastmikroskopi är att omvandla den optiska vägskillnaden för synligt ljus som passerar genom provet till amplitudskillnad, och därigenom förbättra kontrasten mellan olika strukturer och göra dem tydliga och synliga Efter att ha passerat genom provet genomgår ljuset brytning, avviker från den ursprungliga optiska vägen och fördröjs med 1/4 λ (våglängd). Om den optiska vägskillnaden ökas eller minskas med ytterligare 1/4 λ, blir den optiska vägskillnaden 1/2 λ, och interferensen mellan de två ljusstrålarna ökar eller minskar efter att axeln kombinerats, vilket förbättrar kontrasten När det gäller strukturen har faskontrastmikroskop två
speciella skillnader från vanliga optiska mikroskop:
1. Ett ringformat membran är placerat mellan ljuskällan och kondensorn, och dess funktion är att bilda en ihålig ljuskon som passerar genom kondensorn och fokuserar på provet
2. Vinkelfasplatta: En fasplatta belagd med magnesiumfluorid läggs till objektivlinsen, vilket kan fördröja fasen av direkt eller diffrakterat ljus med 1/4 λ. Det kan delas in i två typer:
(1) . A+fasplatta: Fördröj det direkta ljuset med 1/4 λ och lägg till de två uppsättningarna ljusvågor efter att ha kombinerat axlarna. Amplituden ökar och provets struktur blir ljusare än det omgivande mediet och bildar en ljus kontrast (eller negativ kontrast)
(2) . B+fasplatta: Fördröj det diffrakterade ljuset med 1/4 λ och subtrahera ljusvågorna efter att ha kombinerat axlarna för två uppsättningar ljusstrålar, vilket resulterar i en minskning av amplituden och bildar en mörk kontrast (eller positiv kontrast). Strukturen blir mörkare än det omgivande mediet
