Vilka är de speciella strukturella komponenterna i ett fluorescerande mikroskop?
Färgfilterblocket är en viktig del av ett fluorescensmikroskop och dess kärnkomponenter består av ett första barriärfilter för excitationsljus, ett andra barriärfilter för emissionsljus och en stråldelande spegel. Färgfiltermodellerna och namnen på olika tillverkare är ofta inkonsekventa.
1. Excitationsljusfilter och emissionsljusfilter: Baserat på egenskaperna hos ljuskällan och det fluorescerande pigmentet, väljs vanligtvis följande tre typer av matchning för att ge excitationsljus inom ett visst våglängdsområde och tillåta fluorescensen som exciteras av provet att passera igenom och nå okularet för avbildning.
UV-excitering: Excitationsljusfiltret kan tillåta UV-ljus att passera igenom och blockera synligt ljus över 400 nm från att passera igenom. Motsvarande emissionsljusfilter tillåter blått ljus att passera igenom, och ljuset i synfältet ser blått ut, som när det appliceras på DAPI-färgning.
Blåljusexcitering: Excitationsljusfiltret kan låta blått ljus passera och blockera ljus från andra våglängder. Motsvarande emissionsljusfilter tillåter grönt ljus att passera igenom, såsom GFP-färgningsmarkörer.
Grönt ljus excitation: Excitationsljusfiltret tillåter grönt ljus att passera igenom och blockerar ljus från andra våglängder. Motsvarande emissionsljusfilter tillåter vanligtvis rött ljus att passera igenom, såsom Rhodamine-färgning.
2. Semitransparent och semireflekterande färgfilter: Dess funktion är att helt blockera excitationsljuset från att passera och reflektera det; Och avger ljus inom motsvarande våglängdsområde. Dess modell motsvarar excitationsljusfiltret och emissionsljusfiltret.
(2) Objektivlins och okular
Olika objektivlinser kan användas, men det är bäst att välja linser med extra skala och kromatisk aberrationsreduktion, eftersom deras självfluorescens är extremt låg och deras ljustransmissionsprestanda (våglängdsområde) är lämplig för fluorescens. På grund av det faktum att fluorescensljusstyrkan för en bild i mikroskopfältet är direkt proportionell mot kvadraten på bländarförhållandet för objektivlinsen och omvänt proportionell mot dess förstoring, för att förbättra ljusstyrkan hos fluorescensbilder, bör en objektivlins med ett större bländarförhållande användas. Speciellt för prover med otillräcklig fluorescens bör en objektivlins med högt bländarförhållande och hög ljustransmittans användas, tillsammans med ett okular med lägsta möjliga förstoring.
(3) Andra optiska enheter
Det reflekterande lagret i en spegel är vanligtvis belagt med aluminium eftersom aluminium absorberar mindre ultraviolett och synligt ljus i det blålila området och reflekterar över 90 % (medan silver har en reflektionsförmåga på endast 70 %). I allmänhet används platta speglar. Fokuseringslins, speciellt designad och tillverkad för fluorescensmikroskop, är gjord av kvartsglas eller annat glas som överför ultraviolett ljus. Den fallande ljusanordningen är, förutom att ha funktionen av en transmissiv ljuskälla, mer lämpad för direkt observation av ogenomskinliga och halvtransparenta prover, såsom tjocka plattor, filtermembran, bakteriekolonier, vävnadskulturer och andra prover. Under de senaste åren har många nya typer av fluorescensmikroskop utvecklats med hjälp av en fallljusanordning, känd som ett fallande ljusfluorescensmikroskop.
(4) Ljuskälla
Nuförtiden används ofta-högtryckskvicksilverlampor på 50 eller 100W som ljuskällor. Under drift sker urladdning mellan två elektroder, vilket gör att kvicksilver avdunstar och trycket inuti sfären snabbt ökar (denna process tar vanligtvis cirka 5-15 minuter). Under denna process emitteras ljuskvanter, och våglängden på det frigjorda ljuset är tillräcklig för att excitera olika fluorescerande ämnen. Därför används det i stor utsträckning i fluorescensmikroskop.
Livslängden för kvicksilverlampor är relativt kort, vanligtvis 200 timmar. Som svar på denna begränsning i livslängd har en ny typ av lysrörskälla X-Cite använts i stor utsträckning med en superlång livslängd på 2000 timmar och flexibel användning - ingen förvärmning krävs, redo att användas.
